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多花黑麦草根系抑草潜力评价及其化感物质分析

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第22卷第4期 草 业学报 61—68 Vo1.22,No.4 ACTA PRATACULTURAE SINICA 2013年8月 多花黑麦草根系抑草潜力评价及其化感物质分析 董晓宁 ,高承芳 ,张晓佩 ,刘远 ,李文杨 ,翁伯琦 (1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;2.福建省农业科学院农业生态研究所,福建福州350013) 摘要:以我国南方种植较普遍的多花黑麦草‘美克斯’和‘海克里斯’为供体试验材料,以杂草猪殃殃为受体材料,探 讨多花黑麦草根系浸提液的化感潜力及分析主要化感物质成分(GC MS鉴定)。结果表明,2个多花黑麦草根系浸 提液对猪殃殃具有化感抑制作用,对种子发芽率大小的影响与质量分数呈负相关,随着质量分数的增加,抑制作用 加强;美克斯对猪殃殃种子发芽率的抑制作用要强于海克里斯,美克斯对受体种子发芽抑制率为一0.55,海克里斯 的为一0.51;2个多花黑麦草根系浸提液对猪殃殃幼苗生长也存在明显的抑制作用,表现为随着质量分数的增加抑 制作用加强,在10.0 时的综合抑制率最高,其次为7.5 ,再次为5.0 ;相同质量分数下不同品种间以美克斯的 抑制作用要强于海克里斯;美克斯根系浸提液中的化感物质包括12类,与抑制作用相关的酚酸类物质占主要成 分,包括苯酚类和酸类物质。海克里斯根系分泌的化感物质中,脂肪族化合物占主要成分,包括草酸、甲醇、乙醇和 丁醇类。 关键词:多花黑麦草;化感作用;猪殃殃;化感物质 中图分类号:¥543 .6;Q945.79 文献标识码:A 文章编号:1004 5759(2013)04—0061-08 DoI:10.1 1686/cyxb20l30407 化感作用是自然界普遍存在的一种重要的化学生态防御机制,是植物或微生物的代谢产物对环境中其他植 物或微生物所产生的有利或不利的作用¨1 ]。化感抑草就是利用植物相互间的化感作用控制杂草,抑草植物通 过释放化感物质并与杂草竞争生存环境,进而对杂草的发芽和生长产生抑制作用。植物在某一个生长时期内表 现出的化感作用不同[3-7 ̄,其抑制杂草的能力也不同。利用化感作用物质开发出天然除草剂,可以减少化学农药 的大量使用,减轻农业生产对环境的压力,降低农作物中化学农药残留量,促进低碳农业的发展。开发牧草的化 感作用并充分利用植物化感作用的正效应进行生产是一项非常值得推广的技术措施,可为植物生长创造良好的 条件。许多牧草都被鉴定出有化感抑草作用,如苜蓿(Medicago sativa)、苏丹草(Dactylis glom erata)、高粱 (Sorghum vulgare)、毛苕子(Vicia villosa)、白三叶(Trifolium repens)和红三叶(Trifolium pratense)等 。 植物化感作用研究对于防除农田杂草,开发生物除草剂,维持农业可持续发展具有重要意义。 黑麦草(Lolium perenne)是我国南方冬季种植最多的优良饲草品种之一,产量高,品质好。目前黑麦草种植 田间主要杂草为猪殃殃。猪殃殃(Galium aparine)为一年生或二年生蔓状或攀援状双子叶草本,多于冬前出苗, 为长江流域以南地区作物田恶性杂草,常与黑麦草争阳光、争空间,引起其倒伏,造成较大的减产。田间杂草防治 主要方法是化学除草,化学除草不仅会对黑麦草产生影响,而且长期使用会造成环境污染,危害人类健康,并使杂 草对除草剂产生抗性。对于化感抑草植物的研究,较多的是作物、入侵草种及少数的牧草品种;有关黑麦草化感 作用的报道主要集中在探讨黑麦草与豆科牧草的合理耕作方法,黑麦草与白三叶牧草问的化感竞争作用,作为受 体试验材料的选择等_1 。而未见有关报道多花黑麦草作为供体试验材料进行抑草作用的研究。 为了充分开发多花黑麦草利用的新途径,本研究以多花黑麦草为供体试验材料,以猪殃殃为受体材料,研究 多花黑麦草的化感抑草作用,并通过GC—MS(gas chromatograph—mass spectrome)检测其根系水浸提液的主要 化学成分,探讨多花黑麦草根系浸提液的化感潜力及分析主要化感物质成分。本研究能够明确多花黑麦草的化 收稿日期:2Ol2一O9—05;改回日期:2012-11-23 基金项目:福建省科技计划重大专项(2012NZ0002 1 2)和福建省农业科学院青年人才创新基金(2Ol0QA 5)资助。 作者简介:董晓宁(1 956一),男,山东荣成人,研究员。E mail:gaoche“gfang6o2@163.corn *通讯作者。E—mail:boqiweng@yahoo.com ACTA PRATACUI TURAE SINICA(20l3) Vo1.22,No.4 感作用。为化感抑制杂草开发一条新的途径。 l材料与方法 1.1 试验材料 试验所用的供体材料为多花黑麦草:美克斯‘Maximus’、海克里斯‘Hercules’,采自福建省农业科学院畜牧 兽医研究所试验基地。试验地位于福建省福州市晋安区郊区泉头试验场,N 26。O7 58”,E 1l9。2O 17”,海拔40~ 45 ITI。属中亚热带气候,年均温l9.7。C,最热月均温28.8℃,最冷月均温9.0℃,极端低温一1. C,年活动积温 6 530C,年均降水量1 300 mm。土壤为红壤旱地,肥力中等,排水良好。前茬植物为多花黑麦草。 受材料体为杂草猪殃殃种子。 1.2 多花黑麦草根系化感作用的生物检测 l_2.1 母液的制备 采取开花期(2011年5月27日)的多花黑麦草地下部根系,用水冲洗干净后,剪成2 CIll的 小段,称取20 g,用200 mI 蒸馏水浸提,期间经常摇动,48 h后过滤,第一重用定性滤纸过滤,第二重用滤元单位 为0.45/am的滤膜过滤,得到的浸提液质量分数为10.0 A(g/mL),把浸提液放入4℃冰箱中保存,进行生物测 o定。 1.2.2 生物测定 将质量分数为10.0 的浸提液,用蒸馏水稀释成3个不同的质量分数5.0 ,7.5 和 l0.0 。对照加入等量蒸馏水。把用l%次氯酸钠消毒30 rain后的受体植物猪殃殃种子,以100粒 皿播人垫有 2层滤纸的培养皿中,加盖,在光照培养箱(25 C,光照时间12 h/d)培养,每天加入适量的不同质量分数的浸提 液。、试验采用完全随机区组设计,重复3次。播种7 d后测定发芽率,从每个培养皿中随机取1O株幼苗测定根 长及苗高,取平均值。称量每个培养皿中幼苗的总重,根据发芽率计算每株根和苗的鲜重。 使用文献[1 1]的抑制率RI来衡量影响强度。c是对照值,T是处理值,RI—T/C一1(T<c)或1一T/C (T≥ ),RICo时表示促进作用,RICO时表示抑制作用。RI绝对值的大小表示化感作用强度的大小。化感综 合效应(SE)为多花黑麦草在同一处理时对受体杂草4个测试项目抑制率的算术平均值。 1.3 多花黑麦草根系水浸提物化学成分分析 1.3.1材料及样品处理试验前把上述过滤后的多花黑麦草根的浸提液中加入等量的乙醚萃取得到乙醚萃取 液。所得乙醚萃取液分别用旋转蒸发仪在4℃浓缩至干,再分别用1 mL乙醚溶解,用于GC MS分析。 1.3.2 仪器及分析条件 仪器:提取液组分分离与鉴定在福建农林大学应用生态研究所质谱室,采用美国Vari— an Gcsaturn 3900/Saturn 2100气相色谱一质谱联用仪进行GC—MS分析。 毛细管柱:DB一5MS 30 m×0.25 mm×0.5 btm;GC—MS的操作条件为,进样方式:分流进样,进样量1 L,分 流比2o:1;进样KI温度:250 C;载气:99.999 高纯氦气;流速:1 mL/min;色谱条件:柱温采用程序升温,7o C 保留3 rain,以8 C/rain上升到130。C,再以3 C/rain上升到210。C,然后以6。C/min上升到250 C保留5 min;质 谱条件:GC MS接口温度:280C;EI离子源、电离能为70 eV;扫描范围:4O~600 aum;采集方式:全扫描。 1.4数据处理与分析 所得数据均采用Excel、DPS等软件进行方差分析和显著性检验。 2结果与分析 2.1 多花黑麦草根系浸提液对猪殃殃的化感作用 2.1.1 美克斯、海克里斯根系浸提液对猪殃殃种子发芽率的影响 供试2个多花黑麦草根系浸提液对猪殃殃种 子发芽率大小的回归分析呈负相关。海克里斯品种根系不同质量分数与猪殃殃种子发芽率的相关系数小于美克 斯品种。相关系数越大,说明该品种根系质量分数对猪殃殃种子发芽的影响越大。 2个多花黑麦草品种根系在10.0 质量分数处理时的化感抑制作用最强,其次是7.5 ,再次是5.0 ,可 见,多花黑麦草根系浸提液随着质量分数的增加,抑制作用加强;2个多花黑麦草品种间的化感抑制作用中,美克 斯对猪殃殃种子发芽的抑制作用要强于海克里斯,美克斯的平均发芽抑制率为一0.55,而海克里斯的为一0.51 (表1) 第22卷第4期 草业学报2013年 表1 不同质量分数2个多花黑麦草根系浸提液 对猪殃殃种子萌发的影响 Table 1 Influence of different cOncentratiOn roots extracts of 2.1.2美克斯、海克里斯根系浸提液对猪殃殃幼苗生 长的影响 2个多花黑麦草根系浸提液对猪殃殃幼苗 生长存在明显的抑制作用(表2)。美克斯在5.0 时 的综合效应为一0.17,在7.5 时的综合效应为 two L.multiflorum on G.aparine seed germination 0.35,在10.0 时的综合效应为~0.49;海克里斯在 5.0 时的综合效应为一0.16,在7.5 时的综合效应 为一0.30,在10.0 时的综合效应为一0.43;可知美 克斯和海克里斯2个多花黑麦草品种根系浸提液均随 着质量分数的增加,抑制作用加强,在10.0 质量分 数时的抑制作用最强,其次是7.5 ,再次是5.0 ,相 比对照都达到了显著水平。相同质量分数不同品种间 以美克斯的综合抑制效应要强于海克里斯。 2.2 2个多花黑麦草品种根系水浸提物的主要成分 2.2.1美克斯根系的主要成分美克斯根系中,共检 测到烷烃、醇类、酸类、醛类、酮类、苯酚类、烯类、胺类、 酯类、醚类和其他菲类、酰肼类和茚类等物质(表3),这些水溶性化学物质中,仅有少数物质的匹配度未高于 7O ,其余大量酸类、烃类和苯酚类的匹配度均在7O 以上,且保留时间均在10 min以上。这些物质中大量是 烷烃类、苯酚类和酸类,烷烃类物质17个,苯酚类5个,酸类l2个。 表2不同质量分数2个多花黑麦草根系浸提液对猪殃殃幼苗生长的影响 Table 2 Influence of different concentration root extracts of two L.multiflorum on G.aparine seedling growth 注:表中数据分别为根长、苗高与苗鲜重的值±标准误差(3次重复);不同小写字母分别表示相同品种不同浓度间在0.05水平上的显著性差异。 Note:Data is valHes of root length,shoot height and fresh weight±standard error(”=3)in the table.Different lowercase letters mean significant differences at 0.05 kve1. 2.2.2 海克里斯根系水浸提液的主要成分 海克里斯根系中,共检测到烷烃、醇类、酸类、酚类、酮类、酯类、醛 类、苯类、胺类、烯类、萘类等ll类物质(表4),这些水溶性化学物质中,仅有少数物质的匹配度未高于70 ,其余 大量酸类、烃类和醇类的匹配度均在7O 以上,保留时间较短,仅在3 rain以上。这些物质中大量是酸类、烷烃 类和醇类,酸类物质15个,烷烃类13个,醇类5个。 ACTA PRATACUI TURAE SINICA(20 1 3) VoL 22,No4 .表3 美克斯根系浸提液GC—MS分析结果 Table 3 The results of‘Maximus’from root extracts GC—MS analysis 酮类Ketone 3O.3 26.4 28.3 70.3 2一[2二乙氨基乙氧基]一芴一9一酮2一(2一diethylamino—ethoxy)fluoren一9一one 60.5 57.9 1一[4(甲磺酰基)苯基]一乙酰基乙酮卜E4(methylsul{ony!)pheny1]ethanone 雌二醇一1,3,5(10)7-C乙四胺一17酮Estra一1,3,5(10)一trien 17一。ne 第22卷第4期 草业学报2013年 65 醛类Aldehydes 1,2,3,4,4a菲甲醛1一phenanthrenecarboxa1dehyde,1,2,3,4,4a 3,5二叔丁基4一水杨醛3,5-di tert—butyl一4一hydr0xybenzaldehyde 3结论与讨论 3.1 结论 多花黑麦草“美克斯”和“海克里斯”根系水浸提液对猪殃殃的种子发芽以及幼苗的生长有抑制作用,且随着 浸提液质量分数的增加,抑制作用加强。在同一质量分数下,不同品种间‘美克斯’的抑制作用要强于‘海克里 斯’,在5.0 ,7.5 和10.0 三种质量分数下‘美克斯’和‘海克里斯’对猪殃殃幼苗生长的综合抑制效应分别为 0.17,一0.35,一0.49和一0.16,一0.30,一0.43。 经GC—MS结果分析表明,2种多花黑麦草品种‘美克斯’和‘海克里斯’根系水浸液检测到的化学成分中,以 酚酸类和脂肪族化合物为主,‘美克斯’根系浸提液的主要酚酸类成分有草酸、邻苯二甲酸及衍生物、苯酚等;‘海 克里斯’的化感物质中,脂肪族化合物占主要成分,有草酸、甲醇、乙醇和丁醇类。 3.2讨论 植物化感物质可以通过挥发、淋溶、根系分泌、植物残株腐解4种途径_】 ¨ 来抑制杂草。挥发、淋溶2种途径 受环境的影响较大,化感物质很难收集到,采用根系分泌法排除了环境和土壤及微生物的影响。根部分泌的化学 物质具有各种各样的功能,但至少部分根分泌物或其进一步分解物是显示化感作用的_1引。受体杂草猪殃殃为南 方田间常见杂草,具有竞争力强、生长速度快等特点,一般在初春时种子即开始萌发。此时也是多花黑麦草花期, 两者在生态位上有一定的重复。 生物测定是化感作用研究中非常重要的一个环节,确定化感作用大小,化感物质的提取、分离、鉴定时的生物 活性跟踪,以及化感作用机理研究都必须进行生物测定口 。本研究用生物测定方法检测出2个多花黑麦草品种 根系浸提液对伴生杂草猪殃殃有不同程度的抑制作用,进而用乙醚等有机成分浸提根系后,用GC—MS分析,比 较真实地反映多花黑麦草根系浸提液化感物质的成分,在其根系鉴定出化合物12类次,分别包括烷烃、醇 类、酸类、醛类、醚类、酮类、苯酚类、烯类、胺类、酯类和其他菲类、酰肼类、茚类,尚不包括更多低含量的物质未被 鉴定出的化合物。迄今为止,所发现的化感物质的次生代谢产物,一般分子量较小,结构较简单。包括水溶性有 机酸、直链醉、脂肪族醛和酮、简单不饱和内酯、长链脂肪酸和多炔、内萜、氨基酸、生物碱、苯甲酸及其衍生物等 等。其中最常见的是低分子有机酸、酚酸类和内萜类化合物 肌]。本试验所分离鉴定到的化合物不乏此类物 质,证明多花黑麦草根系中含有抑制杂草的化感物质。 66 ACTA PRATACUI TURAE SINICA(20l3) Vol_22No.4 ,表4海克里斯根系浸提液GC-MS分析结果 Table 4 The results of’Hercules‘from root extracts GC—MS analysis 酮类Ketone 4.O 3.7 68.1 68.5 2-(2二乙氨基一乙氧基)一芴~9一酮2一(2-diethylamino—ethoxy)一fluoren一9 one 2,6-二(1,l一二甲基),2,5-环己二烯1 4二酮2,5 cyc[ohcxadi.ene一1,4 dione,2,6 bis(1,1一dimethylethy1)一 第22卷第4期 草业学报2013年 67 酚酸类和脂肪族化合物被鉴定为化感物质 ’ ,在美克斯根系中大量存在,抑制作物生长发育中的种子萌 发[2 引,对稗草(Echinochloa crusgalli)、白茅(Imperata cylindrica)[26,27]有抑制作用;同样,本研究较真实地反 映多花黑麦草根系浸提液化感物质的成分,酚酸类是化感活性较强的一类物质,包括苯酚类和酸类物质。美克斯 对猪殃殃种子发芽及幼苗生长的抑制作用可能与酚酸类物质有关。海克里斯根系分泌的化感物质中,脂肪族化 合物占主要成分,有草酸、甲醇、乙醇和丁醇类,酚类物质中4一苯腈壬基脂邻苯二甲酸能抑制莴苣(Lactuca sati— va)_2胡的种子发芽及幼苗生长。 种问对化感物质敏感性的明显差别可表明实验室生测方法可以作为一个简单但很有效的筛选化感品种的方 法l2 。尽管如此,由于气候、土壤类型、植物和微生物群落组成等的差异,实验室表现的化感作用与自然环境中 的作用存在差异。另一方面,在自然生境中通常也难以将植物直接化感作用和外来植物介导的微生物种群变化 影响区分开来 。因此,本研究下一步的重点是在田间自然条件下观测黑麦草的抑草潜力,并鉴定出化感物质 问相互作用的影响,分析化感作用的释放机理,找到新型生物除草剂的基础物质成分。 参考文献: [1] 王大力.水稻化感作用研究综述[J].生态学报,1998,18(3):326—335. 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Key words:Lolium m ultilforuiTl;allelopathy;Galium aparine;allelochemicals 

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