贝加因与牛血清白蛋白相互作用的分子光谱法研究

第２２卷第１期　２０１１年１月　化学　研究　中国科技核心期刊　ｈｘｙｊ＠ｈｅｎｕ．ｅｄｕ．ｅｎ　ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ　ｂｙ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ＸＩＯＮＧ　Ｌｉ—ｍｉｎ　’　～。ＳＯＮＧ　Ｓｈｅｎｇ—ｍｅｉ　～，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎ—ｔａｎｇ　，ＸＵ　Ｍａｏ—ｔｉａｎ　’　’。　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ　４１００８３，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ　２．Ｈｅｎａｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｂａｓｅ　ｏｆ　Ｎ口舢６　０ｚ０ｇ　ｃ口￡Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｓｈａｎｇｑｉｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｑｉｕ　４７６０００，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ；　３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００１，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅ—　ｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｖａｎ’ｔ　Ｈｏｆｆ　ｅｑｕａｔｉｏｎ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔｓ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｌｕｏｒｅｓ—　ｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｄａｔａ　ｕｓｉｎｇ　Ｓｔｅｒｎ—Ｖｏｌｍｅｒ　ｅｑｕａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈａｔ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｓ　ａｂｌｅ　ｔｏ　ｑｕｅｎｃｈ　ｔｈｅ　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｖｉａ　ｓｔａｔｉｃ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｅｎ—　ｔｈａｌｐｙ　ａｎｄ　ｅｎｔｒｏｐｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ＢＳＡ　ａｒｅ　ｂｏｔｈ　ａｂｏｖｅ　０，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｉｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｉｓ　ｄｏｍｉｎａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　ｆｏｒｃｅ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｓ　ａｂｌｅ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＢＳＡ．Ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃｏｕｌｄ　ｈｅｌｐ　ｔｏ　ｂｅｔｔｅｒ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　３８　ｗｅｌｌ　ａｓ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇｓ　ａｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｌｅｖ—　ｅｌ＿　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂａｉｃａｌｅｉｎ；ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ；ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ＣＬＣ　ｎｕｍｂｅｒ：Ｏ　６２７．１２　Ｄｏｃｕｍｅｎｔ　ｃｏｄｅ：Ａ　Ａｒｔｉｃｌｅ　ＩＤ：１００８—１０１１（２０１１）０１—０００９—０５　贝加因与牛血清白蛋白相互作用的分子光谱法研究　熊利敏　～，宋胜梅　～，张银堂。，徐茂田　（１．中南大学化学与化工学院，湖南长沙４１００８３；　２．商丘师范学院化学系，河南省纳米生物分析化学重点实验室培育基地，河南商丘４７６０００　３．郑州大学化学系，河南郑州４５０００１）　摘要：利用荧光光谱和吸收光谱研究了贝加因与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的相互作用，由Ｖａｎ’ｔ　Ｈｏｆｆ方程计算了　反应的热力学参数，并根据Ｓｔｅｒｎ—Ｖｏｌｍｅｒ方程计算了不同温度下的结合位点和结合常数．结果表明，贝加因可　静态猝灭ＢＳＡ的内源荧光；二者相互作用的焓变和熵变均大于零，说明疏水作用力是二者之间的主要作用力．　与此同时，贝加因可诱导牛血清白蛋白构象变化．相关研究结果有助于在分子水平上更好地理解药物的作用机　理以及吸收和分布特性．　关键词：贝加因；牛血清白蛋白；相互作用；分子光谱　Ｉｔ　ｉｓ　ｉｍｐｅｒａｔｉｖｅ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇｓ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ＳＯ　ａｓ　ｔｏ　ｂｅｔｔｅｒ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃ　ｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｄｒｕｇｓ．　Ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｄａｔｅ：２Ｏ１０　１０　０３．　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｉｔｅｍ：Ｔｈｉｓ　ｗｏｒｋ　ｗａｓ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（２０７７５０４７　ａｎｄ　２０９０５０４５）．　Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ：ＸＩＯＮＧ　Ｌｉ—ｍｉｎ（１９８８一），ｆｅｍａｌｅ，ｍａｓｔｅｒ，ｅｎｇａｇｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．　１Ｏ　化学研究　２０１１年　ａｉｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）ｉｓ　ｕｓｕａｌｌｙ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ　ｆｏｒ　ｍａｎｙ　ｄｒｕｇｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅｉｒ　ｔａｒ—　ｇｅｔｓ，ｄｕｅ　ｔｏ　ｉｔｓ　ｈｉｇｈ　ａｆｆｉｎｉｔｙ　ｔｏ　ｍａｎｙ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ａｎｄ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎ—　ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｍａｌｌ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，　ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ　ａｓ　ｗｅ１１　ａｓ　ｈｉｇｈ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｉｓ　ｏｆ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ口一３］．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ—　ｔｉｍｅ。ｔｈａｎｋｓ　ｔｏ　ａ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ，ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ　ａｎｄ　ａｎｔｉｃａｎ—　ｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ，ｂａｉｃａ１ｅｉｎ（５，６，７一ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ一２一ｐｈｅｎｙｌ一４Ｈ一１一ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ一４一ｏｎｅ，Ｆｉｇ．１）ａｓ　ａ　ｍａｊｏｒ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｅｘ—　ｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｈｕａｎｇｑｉｎ　ｈａｓ　ａｔｔｒａｃｔｅｄ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ　ａｔｔｅｎｔｉｏｎ【４］；ａｎｄ　ｉｔ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｃａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｓｉｓｔ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　．　Ｉｎ　ｔｈｅ　Ｄｒｅｓｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ＢＳＡ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ—ｖｉｓｉｂｌｅ　ｌｉｇｈｔ（ＵＶ—Ｖｉｓ）ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｂｙ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｅｄ．　２　ＨＯ　０　４　Ｈ０　０Ｈ　Ｆｉｇ．１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　１　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｈｅ　ｓｔｏｃｋ　ｓ０１ｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ，Ｓｔ　Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）ｗｉｔｈ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１×１０＿４　ｍｏ１．Ｌ一１　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ　ａｓ—ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｓｏｌｉｄ　ＢＳＡ　ｉｎ　０．５　ＮａＣ１　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｔｏｒｅｄ　ａｔ　０－－４℃・　Ｔｈｅ　ｓｔｏｃｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ（Ｐａｎｙａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ　Ｌｔｄ，ＵＳＡ）ｗｉｔｈ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１×１０　ｍｏｌ‘Ｌ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ　ａｎ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｎｔｏ　ｅｔｈａｎｏ１．　２０　ｍｍｏｌ・Ｌ一　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆ—　ｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ，ｐＨ　７．４，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１５０　ｍｍｏｌ・Ｌ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ）ｗ３ｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｈｅ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｌｌ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｕｌｔｒａｐｕｒｅ　ｗａｔｅｒ（１８．２　ＭＱ，Ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ　Ｐｌｕｓ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒ—　Ｄｏｒａｔｉｏｎ）．Ａｌｌ　ｏｔｈｅｒ　ｒｅａｇｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｐｕｒｃｈａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｌａｎｔ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）ａｎｄ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ—　ｏｕｔ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．　Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　７　６０一ＣＲＴ　ｄｕａｌ—ｂｅａｍ　ＵＶ—Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｓｈａｎｇ—　ｈａｉ　Ｐｒｅｃｉｓｉ０ｎ　８乙Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ　Ｌｔｄ，Ｃｈｉｎａ）．Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｓＰｅｃｔｒａ　ｂｅ－　ｔｗｅｅｎ　３００－－４５０　ｎｍ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　Ｓｈｉｍａｄｚｕ　ＲＦ一５　３０　１　ＰＣ　ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ　Ｃｏｒｐｏｒａ—　ｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ；ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　２９５　ｎｍ）ｅｑｕｉｐｐｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　１５０　Ｗ　ｘｅｎｏｎ　ｌａｍｐ’１　ｃｍ　ｑｕａｒｔｚ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ａ　ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔ　ｂａｔｈ．Ｔｈｅ　ｐＨ　ｖａ１ｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐＨＳ一２Ｃ　ｐＨ　ｍｅｔｅｒ（Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｇｒａｎｄ　Ｐ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ　Ｌｉｍｉｔｅｄ）．Ｏｒｉｇｉｎ　８．０　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｃｕｒｖｅ　ｆｉｔｔｉｎｇ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｗａｓ　ｃｏｒｒｅｃ－　ｔｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ［８］．　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ　Ｆｉｇ．２　ｓｈｏｗｓ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｒ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ．Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｉｎ—　ｔｅｎｓｉｔｖ　ａｔ　２２０　ｎｍ　ａｎｄ　２３５　ｎｍ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ；ｔｈａｔ　ａｔ　２７１　ｎｍ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｆｉｒｓｔｌｖ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ　ｂｙ　ｒｅｄ　ｓｈ‘士ｔ　ｕＰｏｎ　ａｄｄｌ－　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａ１ｅｉｎ．Ｔｈｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｅｘｉｓｔｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＢＳＡ　ａｎｄ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ・　Ｂｅｓｉｄｅｓ，　ａｎ　ｉｓｏｂｅｓｔｉｃ　ｐｏｉｎｔ　ｅｍｅｒｇｅｓ　ａｔ　２５９　ｎｍ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０—５．１７×１０　ｍｏｌ‘Ｌ＿｜１，　ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ａｔｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｖｅｒｉｆｙ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＢＳＡ　ａｎｄ　ｂａ一　第１期　熊利敏等：贝加因与牛血清白蛋白相互作用的分子光谱法研究　１１　ｉｃａｌｅｉｎ，ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ（Ｆｉｇ．３）．Ｉｔ　ｉｓ　ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　２　１　７　ｎｍ　ｓｈａｒｐｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓａｐｐｅａｒｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｃｏｎ—　ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢＳＡ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ａｔ　２６５　ｎｍ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ｓｌｏｗｌｙ，ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ　ｂｙ　ｓｌｉｇｈｔ　ｂｌｕｅ　ｓｈｉｆｔ　ｔｏ　２５９　ｎｍ　ａｎｄ　ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｎ　ｉｓｏｂｅｓｔｉｅ　ｐｏｉｎｔ　ａｔ　２６１　ｎｍ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ＢＳＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０—　９．６６×１０　ｍｏｌ・Ｉ　＿。．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｐｅａｋ　ｂｌｕｅ　ｓｈｉｆｔｅｄ　ｔｏ　２５５　ｎｍ　ｗｉｔｈ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；ｂｕｔ　ｔｈｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｃａｕｓｅｄ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ａｔ　３５６　ｎｍ．Ｔｈｉｓ　ｉｍｐｌｉｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ＢＳＡ　ｈａｐｐｅｎｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒｉｎｇ　Ａ（Ｆｉｇ．１）ｏｆ　ｂｅｎｚｏｌｙＬ　．Ｔｈｅ　ｅｘ—　ｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｌｅａｒ　ｉｓｏｓｂｅｓｔｉｃ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｔ　２８６　ｎｍ，３３７　ｎｍ　ａｎｄ　４０３　ｎｍ　ａｌｓｏ　ｃｏｎｆｉｒｍｓ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ—　ＢＳＡ　ｃｏｍｐｌｅｘ．　Ｃｂａｉｃａｌ　（１０　ｍｏｌ・Ｉ　～，ｃｕｒｖｅ（１—１０）：　ＣＢＳＡ（１０　ｍｏｌ・Ｌ～，ｃｕｒｖｅ（１—９）：　０，０．９．１．７９。２．６５，３．５１，３．９３，５．１７，６．７８，８．３３，９．８４）　Ｆｉｇ．２　ＵＶ—Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　９．０９　Ｘ　１０一　ｍｏｌ・Ｌ一　０，０．４９，２．４Ｏ，４．８５，７．２６，９．６６，ｌ４．４，１９．１，２６．１）　Ｆｉｇ．３　ＵＶ—Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　２．４４　Ｘ　１０一　ｍｏｌ・Ｉ　～。　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢＳＡ　ａｔ　ｐＨ　７．４　ＢＳＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　ｐＨ　７．４　Ｆｉｇ．４　ｓｈｏｗｓ　ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｓｅｅｎ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎ—　ｔｒｉｎｓｉｃ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｉｓ　ｑｕｅｎｃｈｅｄ　ｒｅｇｕｌａｒｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｍａｘｉｍａ　ｉｎａｐｐｒｅｃｉａｂｌｙ　ｓｈｉｆｔｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎ—　ｃｒｅａｓｉｎｇ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｔａｋｅ　ｐａｒｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｗｉｔｈ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ．Ｔｈｅ　Ｓｔｅｒｎ—Ｖｏｌｍｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（Ｆｏ／Ｆ　）ａｓ　ａ　ｆｕｎｃ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｎｃｈｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ［Ｑ］ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｏ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅ　ｔｈｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ（Ｆｉｇ．５）．Ａｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．５，ｔｈｅ　Ｓｔｅｒｎ　Ｖｏｌｍｅｒ　ｐｌｏｔｓ　ａｒｅ　ｌｉｎｅａｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｌｏｐｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｓｔａｔｉｃ［１　０１．　Ｃｂａｉ　Ｉ　ｉｎ（ｔｚｍｏｌ・Ｌ，ｃｕｒｖｅ（１—９）：　．一２９５　ｎｍ　０，０．２４，０．７２，１．４４，２．８８，４．３Ｉ，６．２１，９０５，１　６．１）　Ｆｉｇ．５　Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ　ｃｕｒｖｅｓ　ｆｏｒ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｂｙ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　ｐＨ＝７．４（ＰＢＳ）　Ｆｉｇ．４　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　３．８５　Ｘ　１０一　ｍｏｌ・Ｌ一　ＢＳＡ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｃｏｎｃｅｎｔａｔｉｒｏｎｓ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　３１０　Ｋ　Ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　Ｋ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｑｕａｔｉｏｎ（１）ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｄｒｕｇ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｂｉｎｄ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ｔｏ　ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ｓｉｔｅｓ　ｏｎ　ａ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　Ｅｌｌ　３：　ｌｏｇ［　］一ｌｏｇＫ　。ｇＥＱ］　（１）　１２　化学研究　２０１１年　Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　Ｋ　ａｎｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｃａｎ　ｔｈｅｒｅｂｙ　ｂｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ　ａｎｄ　ｓｌｏｐｅ　ｂｙ　ｐｌｏｔｔｉｎｇ　ｌｏｇ（Ｆ。－－Ｆｃ。　）／Ｆｃ。　ｖｅｒｓｕｓ　ｌｏｇ［Ｑ］，ａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．６．Ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｒｅ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｔａ—　ｂｌｅ　１．　Ｔａｂｌｅ　１　Ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ａｎｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｆｏｒ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ－ＢＳＡ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ａｔ　ｐＨ　７・４　Ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　Ｋ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ｔｈａｔ　ｂａｉｃｌａｅｉｎ　ＢＳＡ　ｌｏｓｅｓ　ｉｔｓ　ｓｔａ—　ｂｉｌｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓ　ｔｏ　ｓｔａｔｉｃ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｒ／ａｒｅ　ａｐｐｒｏｘｉ　ｍａｔｅｌｙ　ｅｑｕａｌ　ｔｏ　１，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｆｏｒ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｔｏｗａｒｄｓ　ＢＳＡ．　Ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ，　ｆｒｅｅ　ｅｎｅｒｇｙ　ｃｈａｎｇｅｓ（ＡＧ），ｅｎｔｈａｌｐｙ　ｃｈａｎｇｅｓ（ＡＨ）ａｎｄ　ｅｎｔｒｏｐｙ　ｃｈａｎｇｅｓ（ＡＳ），ｃａｎ　ｂｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ｖａｎ’ｔ　Ｈｏｆｆ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｌｎＫ。一一ＡＨ／ＲＴ＋ＡＳ／Ｒ，ａｎｄ　ＡＧ　ｃａｎ　＼　ｂｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ＡＧ—ＡＨ—ＴＡＳ　一一ＲＴ　ｌｎＫ　．Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ＡＧ，△Ｈ　ａｎｄ　ＡＳ　ａｒｅ　ａｌ—　ｓｏ　ｌｉｓｔｅｄ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　１．Ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ△Ｇ　ｍｅａｎｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ，ａｎｄ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｌｏｇｔＱ１　ＡＳ　ｖａｌｕｅ　ｉｓ　ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ａｎ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｔｏ　ｈｙｄｒｏ—　Ｄｈｏｂｉｃ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＥ　Ｂｅｓｉｄｅｓ，ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＡＳ　Ａ　一２９５　ｒｉｍ　．ａｎｄ　ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ△Ｈ　ｆｏｒ　ｉｏｎｉｚｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ａｑｕｅ—　Ｆｉｇ．６　Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ　ｃｕｒｖｅｓ　ｆｏｒ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ＢＳＡ　ＯＵＳ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｕｓｕａｌｌｙ　ｐｏｉｎｔ　ｔｏ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ　ｉｎ—　ｂｙ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　ｐＨ　７．４　ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｓｉｎｃｅ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｉｓ　ｌａｒｇｅｌｙ　ｕｎｉｏｎｉｚｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｂｅ　ｐｒｅｃｌｕｄｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｉｓ　ｍｅａｎｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｉｃａｌｉｅｎ　ａｎｄ　ＢＳＡ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ｍａｉｎｌｙ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ．　Ｔｈｅ　ｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒａ（Ｆｉｇ．７）ｏ｛　ＢＳＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｔｏ　ｅｘ—　ｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＢＳＡ．Ａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．　７　ａ。ｔｈｅ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ＢＳＡ　ａｎｄ　ａ　ｓｌｉｇｈｔ　ｒｅｄ　ｓｈｉｆｔ，　ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ＢＳＡ　ａｆｆｅｃｔｓ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉ—　ｄｕｅ．Ｉｔ　ｉｓ　ｌｉｋｅｌｙ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　ＢＳＡ　ｔｅｎｄｓ　ｔｏ　ｃｏｌｌａｐｓｅ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ，ａｌｌｏｗｉｎｇ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　（ａ）△　一６０　Ｎｉｎ；（ｂ）　１５　ｎｌＴ１．Ｃｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　（“ｔｏｏｌ・Ｌ　１，ｃｕｒｖｅ　１一Ｉ１）：０，０．１，０．４８１，　０．９６，１．４９，２．２１，３．８３，５．７４，８．５８，１４．７，１９．３　ｎｅｇｌｉｇｉｂｌｅ　ｓｈｉｆｔ　ｏｆ　Ｔｙｒ—ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　Ｆｉｇ．７ｂ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ｔｈａｔ　Ｆｉｇ．７　Ｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ３．８５　１０Ｉ　Ｌ　ｔｈｅ　Ｔｙｒ—ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｓ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ　ｍｉｃｒｏｒｅｇｉｏｎ　ｌｉＳＡ　ｕｐｏｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｔ　３１０　Ｋ　ａｎｄ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃ—　ｉｎ　ＰＢＳｗｉｔｈ　ａ　ｐＨ　ｏｆ７．４　ｔｉｏｎ　Ｄｒｏｃｅｓｓ［　。一　引．　Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｓ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　Ｔｙｒ—ｒｅｓｉｄｕｅ，ｗｈｉｃｈ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ｔｈａｔ　ｔｒｙｐ—　ｔｏｐｈａｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｇｒｅａｔｌｙ　ｔｏ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢＳＡ［　．　第１期　熊利敏等：贝加因与牛血清白蛋白相互作用的分子光谱法研究　１３　３　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ＢＳＡ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ＵＶ—Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ｆｌｕｏｒｅｓ—　ｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｉｔ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ａ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ａｎｄ　ＢＳＡ　ｉｓ　ｆｏｒｍｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｔａｔｉｃ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｉｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｑｕｅｎｃｈ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｃｏｎｓｔａｎｔ，　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ａｎｄ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｄａｔａ．Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ△Ｈ，ＡＳ　ａｎｄ　ＡＧ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ，ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｅｎｔｒｏｐｙ—ｄｒｉｖｅｎ，ａｎｄ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　ｉｎｔｅｒ　ａｃｔｉｏｎ　ｐｌａｙｓ　ａ　ｍａｊｏｒ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈａｔ　ｂａｉｃａｌｅｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｃｈａｎｇｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｆｏｒ—　ｍａｒｉｏｎ　ｏｆ　ＢＳＡ．Ｈｏｐｅｆｕｌｌｙ，ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｓ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｃｈ—　ａｎｊｓｍ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｗｊｔｈ　ｂａｊｃａｌｅｉｎ．　ＲｅｆｅＦｅｎｃｅｓ：　［１］ＫＡＭＡＴ　Ｂ　Ｐ，ＳＥＥＴＨＡＲＡＭＡＰＰＡ　Ｊ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ　ｓｕｌｐｈａｔｅ　ａｎｄ　ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ　ｗｉｔｈ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ：ａ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｅｍ　Ｓｃｉ，２００５，１１７（６）：６４９—６５５．　［２］ＷＡＲＤ　Ｉ　Ｄ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌｉｇａｎｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｂｙ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒ０ｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ，１９８５，１１７：　４０Ｏ一４ｌ４．　［３］ＲＡＷＥＩ　Ｈ　Ｍ，ＦＲＥＹ　Ｓ　Ｋ，ＭＥＩＤＴＮＥＲ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｂｙ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ＆Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，５Ｏ（８）：７０５—７１３．　［４］ＳＯ　Ｆ　Ｖ，ＧＵＴＨＲＩＥ　Ｎ，ＣＨＡＭＢＥＲＳ　Ａ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ＭＣＦ－７　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ａｎｄ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｘｃｅｓｓ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔ，ｌ９９７，１１２（２）：１２７—１３３．　Ｅ５２　ｓｃＨＥＣＫ　Ｃ　Ａ，ＰＥＲＲＹ　Ｋ，ＨＡＮＫ　Ｃ　Ｎ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍａｔｕｒｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ　ｂａ—　ｉｃａｌｅｎｓｉｓ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｂｒａｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｃｏｍｐｌｅ　Ａｌｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃ，２００６，６（１）：１—９．　［６］ＤＯＮＧ　Ｈｕｉ　Ｒｕ，ＢＩ　Ｐｅｎｇ　Ｙｕ，ＬＩ　Ｓｉ　Ｒｕｉ．Ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｉｃａｌｉｎ　ｗｉｔｈ　ｆｅｒｒｏｕｓ（ｉｉ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｎａｔｕｒ　Ｃｏｍｐ，２００５，４１（２）：ｌ５８—１６１．　［７］ＧＡＯ　Ｚｈｏｎｇ　Ｈｏｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｋａｉ　Ｘｕｎ，ＸＵ　Ｈｕｉ　Ｂｉ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ　ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ　ｇｅｏｒｇｉ　ａｇａｉｎｓｔ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ＨＳ￣ＳＹ５Ｙ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃ　Ｒｅｓ，２００１，４３（２）：１７３～１７８．　［８］ＳＴＥＩＮＥＲ　Ｒ　Ｆ，ＷＥＩＮＲＹＢ　Ｉ．Ｅｘｃｉｔｅｄ　ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：ｐｌｅｎｕｍ　ｐｒｅｓｓ，１９７１．　［９］ＳＵＮ　Ｙａｎ　Ｔａｏ，ＢＩ　Ｓｈｕ　Ｙｕｎ，ＳＯＮＧ　Ｄａ　Ｑｉａｎ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＤＮＡ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ　ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ　ｇｅｏｒｇｉ￣Ｊ］．Ｓｅｎｓ　Ａｃｔｕａｔ　Ｂ，Ｃｈｅｍ，２００８，１２９（２）：７９９—８１０．　［１ｏ］Ｉ　ＡＫＯＷＩＣＺ　Ｊ　Ｒ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｍ］．２ｎｄ　ｅｄ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：ｐｌｅｎｕｍ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９．　［１１］ＭＩＮ　Ｊｉａｎｇ，ＸＩＥ　Ｍｅｎｇ　Ｘｉａ，ＤＯＮＧ　Ｚｈｅｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｎｎａｍｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｈｙｄｒｏｘ　ｙｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌｅｃ　Ｓｔｒｕｃｔ，２００４，６９２（１／３）：７１—８０．　［１２］ＲＯＳＳ　Ｐ　Ｄ，ＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＮ　Ｓ．Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ：ｆｏｒｃｅｓ　ｃｏｎｔｒｉｕｂｕｔｉｎｇ　ｔｏ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８１，２０（１１）：３０９６—３１０２．　［１３］ＭＩＬＩ　ＥＲ　Ｊ　Ｎ．Ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ａｎａｌ　Ｄｉｖ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，１９７９，１６：２０３—２０８．　［１４］ＫＬＡＪＮＥＲＴ　Ｂ，ＢＲＹＳＺＥＷＳＫＡ　Ｍ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ＰＡＭＡＭ　ｄｅｎｄｒｉｍｅｒｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ　［Ｊ］．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，５５（１～２）：３３—３５．　［１５］ＺＨＡＮＧ　Ｈｕａ　Ｘｉｎ，ＨＵＡＮＧ　Ｘｉｎｇ，ＭＥＩ　Ｐｉｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒｉｅｙｃｌａｚｏｌｅ　ｗｉｔｈ　ｐ－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ　ａｎｄ　ｈｕ　ｍａｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ　ｂｙ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃ，２００６，１６（３）：２８７—２９４．　［１６］ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ　Ｍｅｉ，ＺＨＯＵ　Ｑｉｕ　Ｈｕａ，ＷＡＮＧ　Ｙａｎ　Ｑｉｎｇ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　２，４－ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ　ａｎｄ　２，４－ｄｉ—　ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｏｌ　ｗｉｔｈ　ｔｒｙｐｓｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃ，２０１０，２０（２）：５０７—５１６．