雷公藤多甙致雌性小鼠生殖功能低下模型证候初探

维普资讯 http://www.cqvip.com 福建中医药２００７年４月第３８卷　第２期　　Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＴＣＭ　Ａｐｒｉｌ　２００７　３８（２）４３　雷公藤多甙致雌性小鼠生殖功能低下模型证候初探　张黎鹏，吴克明，童妍，王家葵　（成都中医药大学，四川成都６１００７５）　关键词：生殖功能低下；雷公藤多甙；动物模型；中医证候　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１０００－３３８Ｘ（２００７）０２－００４３－０２　临床报道及药理研究表明，雷公藤能造成育龄期　女性生殖功能低下口．２］，我们拟用其这一特性建立一新　的生殖功能低下动物模型。通过前期药物量效关系研　究．我们已初步探索出了雷公藤多甙有效的造模用药　剂量及造模时间。本文用临床已知的中药、西药对该　模型进行治疗，以探讨该模型的可治疗性，并初探雷　公藤多甙致雌性小鼠生殖功能低下模型的证候特点。　１　材料　生产．批准文号为国药准字Ｚ４３０２０１３８；新加归肾丸　（熟地黄、菟丝子、肉苁蓉、杜仲、山茱萸、枸杞、当归　等）由成都中医药大学附属医院制剂室制成浓缩药　液，１４　ｇ（原生药）／ｋｇ体重（成人１Ｏ倍量）。倍美力　（结合雌激素）由爱尔兰惠氏药厂生产（进口药品注　册证号ＢＨ２００５０４９８，分包装国药准字：Ｊ２００５０１２０），　按成人用量的１０倍制成药液。　２　方　法　１．１　动物：健康昆明种成熟雌性小鼠７＂－－＇８周龄，６０　只．体重２５￣２８　ｇ。均为清洁动物，检疫合格。由成都　中医药大学动物实验中心提供，合格证号为川实动　管质第８号。　１．２药品：雷公藤多甙片由湖南协力药业有限公司　收稿日期：２０ｏ６—１２—１Ｏ　基金项目：四川Ｉ省科技厅科研基金资助项目（Ｎｏ．０４ＪＹ０２９），四川ｉ省教　育厅科研基金资助项目（Ｎｏ．２００４Ｃ００４）　作者简介：张黎鹏（１９８１一），女，硕士研究生。　对６０只小鼠全部行阴道细胞学涂片．筛选出有　正常动情周期者为受试动物。随机取其中１０只做为　正常对照组．其余小鼠给予雷公藤多甙片４０　ｍｇ／　（ｋｇ・ｄ）灌胃，连续１０周，并观察小鼠一般生理状况。　于灌胃第７～１０周，连续每日阴道细胞学涂片，观察　动情周期变化情况．以确定造模成功（注：造模过程　中有５只小鼠死亡）。　将已造模小鼠随机分为３组．每组１５只．分别　３讨论　中药高分子控释贴膜剂是我们应用现代化工艺　研制成的中药控释剂型。该贴膜成分主要由长期临　床筛选的处方细辛、三七、红花、血竭等地道中药材　中提取的有效成分水杨酸甲酯、细辛素、三七皂甙　Ｒ１、三七皂甙Ｒ２、４一二羟基一５一甲基一６一甲氧基查耳　酮．与成膜材料耦合制成贴膜，利用微孔控释技术，　对中药有效成分长程释放、透皮肤吸收。由于贴膜剂　的有效成分经皮肤吸收直接进入靶病灶．既可避免　药物的“首过效应”及胃肠道反应．又可避免口服、注　射给药所引起的局部组织血药浓度低或峰谷现象．　减少了全身的毒副反应。　　’本研究观察到中药高分子控释贴膜对以上４种　与软组织损伤相关的急性或亚急性非感染性炎症反　应动物模型。与疼痛模型的炎症和疼痛反应都有明　显的对抗作用。通过对二甲苯诱发大鼠耳肿胀实验、　醋酸诱发大鼠毛细血管通透性实验研究发现，本贴　膜有较明显的抑制炎症水肿作用。通过对蛋清诱发　大鼠足肿胀实验、棉球诱发大鼠肉芽肿实验研究还　发现．本贴膜具有较长时间抑制慢性或亚急性反应　过程．提示中药高分子控释贴膜具有显著抗炎镇痛　作用的同时兼有快效、长效之持点，这与我们前阶段　药理学实验结果一致。有文献报道［。　］，三七总皂、延　胡索、血竭有明显的抗炎和镇痛作用；红花改善微循　环作用较强．临床常用的红花油主要成分就是从红　花提取。本品处方中即含有这些与之相关的药材．而　且经组成复方后．可能通过药物间的相互协同而产　生较单味药更强的作用．这可能本贴膜在动物实验　中产生显著作用的原因之一。此外，我们前阶段的机　制研究中也发现，本贴膜还具有显著抑制动物模型　中损伤局部组织的前炎症因子包括ＩＬ一１Ｂ、ＩＬ一６、　ＴＮＦｏ￣的释放。这些证据提示，中药高分子控释贴膜　是一个有良好抗炎镇痛作用的中药外用制剂。中药　贴膜控释技术值得进一步开发和研究。　参考文献：　［１］徐叔云，卞如谈，陈修．药理学实验方法［Ｍ］．３版．北京：人民卫　生出版社．２００２：９１１．　［２］王巨存，冯亦颖，李建兵，等．消肿膏抗炎镇痛药效学研究［Ｊ］．　中国骨伤．２００４，１７（５）：３１０—３１１．　［３］　姜胜启，张辛．三七的药理作用及临床应用［Ｊ］．中国现代实用　医学杂志，２００４，３（４）：３１—３２．　［４］王继国，雍克岚，陈旭，等．中药血竭的化学模式识别研究［Ｊ］．　上海大学学报：自然科学版，２００４，１Ｏ（１）：７５—７８．　［５］许翔鸿，王峥涛．延胡索中生物碱成分的研究［Ｊ］．中国药科大　学学报．２００２，３３（６）：４８３—４８６．　［６］周虎田，张世春．藏红花新的研究进展［Ｊ］．中华临床新医学，　２００４，４（２）：１１９．　维普资讯 http://www.cqvip.com 福建中医药　为新加归肾丸组、倍美力组、模型组；加上造模前的　正常对照组．共４组。按体重灌胃每日１次．空白对　照组和模型组予以蒸馏水，共３周。每日阴道细胞学　涂片，观察动情周期变化情况。第３周末，每组随机　抽取１０只小鼠（因经费限制），取血、处死，检测相关　指标。雌、孕激素检测采用放免法，子宫、卵巢切片常　规ＨＥ染色，光镜下观测。　统计分析均采用ＳＰｓＳ　１３．０统计软件进行处理．　定量指标用Ｏｎｅ—Ｗａｙ　ＡＮＯＡＹ方差分析．数据均用　表示。　第３８卷　３＿２＿４对子宫厚度的影响：见表４。　表４各组子宫内膜、肌层厚度比较（　＋ｊ）ｔｌ，ｍ　注：与模型组比较，１）Ｐ＜０．０５　由表４可以看出，新加归肾丸组、倍美力组与模　型组比较，子宫内膜厚度有明显升高趋势，子宫肌层　３结　果　３．１　动物一般状态：给予雷公藤多甙造模１０周后，　较之正常对照组．模型组中小鼠大便较稀．毛少光　泽，活动频度减少。　３．２雷公藤模型用药后结果比较　３．２．１　对动情周期的影响：见表１。　表１　各组动情周期比较（　＋ｊ）ｄ　注：与模型组比较，１）Ｐ＜０．０１，２）Ｐ＜０．０５　由表１可以看出，新加归肾丸组、倍美力组与模　型组比较，动情周期均缩短（Ｐ＜０．０１）。新加归肾丸　组的动情周期与正常对照组虽有差异（Ｐ＜０．０５），但　其值已基本接近正常动情周期。　３．２．２对子宫指数、卵巢指数的影响：见表２。　表２各组子宫、卵巢指数比较（　＋ｊ）　１０。　注：与模型组比较，１）Ｐ＜０．０５　由表２可以看出．新加归肾丸组、倍美力组与模　型组比较，子宫指数均升高（Ｐ＜０．０５），卵巢指数有　升高趋势，但统计学无显著差异（Ｐ＞０．０５）。新加归　肾丸组与正常对照组比较，子宫指数及卵巢指数无　统计学差异（Ｐ＞０．０５）。　３．２．３对血清雌、孕激素的影响：见表３。　表３各组血清雌、孕激素比较（　）　注：与模型组比较，１）Ｐ＜０．０５　由表３可以看出．新加归肾丸组、倍美力组与模　型组比较，雌、孕激素水平均升高（Ｐ＜０．０５）。新加归　肾丸组、倍美力组与正常对照组比较，雌、孕激素水　平无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。　厚度升高（Ｐ＜０．０５）。　３－２．５对卵巢的影响：见表５。　表５各组卵巢卵泡数、黄体数比较（　）　个　注：与模型组比较，１）Ｐ＜０．０５　由表５可以看出．新加归肾丸组、倍美力组与模　型组比较，卵泡总数、生长卵泡数均有升高趋势，但　统计学无显著性差异（Ｐ＞０．０５），新加归肾丸组较模　型组黄体数明显升高（Ｐ＜０．０５）。　４讨论　我们的前期研究表明．用雷公藤多甙片４０　ｍｇ／　（ｋｇ・ｄ）灌胃，连续１０周，可造成较为明确的雌性小　鼠生殖功能低下。本实验选用的新加归肾丸为成都　中医药大学妇科吴克明教授在明代《景岳全书》归肾　丸基础上化裁而来的长期临床经验用方，体现补肾　填精、养血调肝、补益冲任的治法，该方对女性肾虚　生殖功能低下病症有确切疗效。倍美力临床用于治　疗性腺功能减退等所致的雌激素低下症。治疗后观　测到，２组药物均能在卵巢、子宫、生殖激素水平明　显改善雷公藤所致的生殖毒性，且治疗后大多数指　标与正常组无差异（Ｐ＞０．０５）。　本结论说明，①用本模型中提出的雷公藤造模剂　量和时间．能造成确切的雌性小鼠生殖功能低下状　态，说明该模型是可复制的。②雷公藤多甙致雌性小　鼠生殖功能低下模型是可以被治疗的。（　中医认为　“肾主生殖”．生殖功能受肾气调控，肾精、肾气亏虚是　生殖功能低下的根源：且造模后小鼠未表现出明显的　肾阴虚或肾阳虚征象．故认为该模型属中医“肾气亏　虚”动物模型［３］。④“补肾填精”为主的新加归肾丸对　该模型有确切的治疗效果，亦反证了该模型是属于肾　气亏虚动物模型。本模型为天然药物制剂构建的动物　模型．模拟了临床女性生殖功能低下的病理状态，为　临床研究生殖功能低下相关疾病的药物筛选、机理研　究等提供了一种较为理想的动物模型。　参考文献：　［１］莫惠平，潘秋荣，谭柳群．雷公藤多苷的不良反应及防治措施　［Ｊ］．柳州医学，２００３，１６（２）：９２－９４．　［２］郝丽，卢文，林辉，等．雌孕激素替代治疗雷公藤所致卵巢早衰　的疗效观察［Ｊ］．中华肾脏病杂志，２００５，２１（３）：１４３－１４５．　［３］彭成．试论中药药理动物模型［Ｊ］．中药药理与临床，１９９９，１５（５）：　４７—４９