mir-367对人乳腺癌mcf-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

影响及其机制周春I,王光华2,张帮柱2（1.攀枝花学院临床医学院外科教研室，四川攀枝花617000； 2.攀枝花学院附属医院普外科，四川攀枝花617000）［摘 要］ 目的：探讨miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响，并阐明其作用机制。 方法：检测乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-367相对表达水平。将miR-NC或miR- 367-inhibitor转入MCF-7细胞作为阴性对照组和mlR-367-mhPeor组，检测2组MCF-7细胞活性、细胞集落数、

K167阳性表达率、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。将miR-NC或miR-367-mcmc转入 MCF-7细胞作为阴性对照组和mR-367-mimc组,检测2组MCF-7细胞集落数、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数

和KLF4相对表达水平。结果：与癌旁组织或MCF-10A细胞比较，乳腺肿瘤组织和MCF-7细胞中miR-367相

对表达水平均明显升高（P<0. 01）。与阴性对照组比较，miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中miR-367相对表达 水平、细胞活性、细胞集落数、K167阳性表达率、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显降低（P<0. 01）,

KLF4相对表达水平明显升高（P<0. 01）；与阳性对照组比较，miR-367-mimc组MCF-7细胞中miR-367相对

表达水平、细胞集落数、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显升高（P<0. 01）, KLF4相对表达水平明显降低

（P<0.01）。结论：miR-367可促进MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移，其机制可能与抑制KLF4的表达有关。［关键词］ 微小RNA-367； Krtippel样因子4；乳腺肿瘤；细胞增殖；迁移；侵袭［中图分类号］R737. 9

［文献标志码］AEffects of miR-367 on proliferation, invasion and migration of

human breast cancer MCF-7 cells and theirmechanismsZHOU Chun1 , WANG Guanghua2 , ZHANG Bangzhu2（1. Department of Surgery, School of Clinical Medine, Panzhihua University, Panzhihua 617000, China；2. Department of General Surgery, Affiliated Hospital, Panzhihua University, Panzhihua 617000, China）ABSTRACT Objective： To investigate the effects of miR-367 on the proliferation, invasion and migrationof thehuman breast cancer MCF-7 cells, and to elucidate their mechanisms. Methods： The relative expression levels of

miR-367 in the breast cancer tissues, adjacent tissues, MCF-7 cells and MCF-10Acelbwere detected. The MCF-7

cellswere transfectedwith miR-NC or miR-367-inhibitor as negative control group and miR-367-inhibitor group, and the cell viabilities, the number of colonies, the positive expression rates of Ki67, the rate of cell wound healing, the

number of invasive cells and the relative expression levels of KLF4 in the MCF-7 cells in two groups were detected.

The MCF-7 cells were transfected with miR-NC or miR-367-mimic asnegative control group and miR-367-mimic group, and the number of colonies, the rates of cell woundhealing, the number of invasive cells and the relative

expression levels of KLF4 in the MCF-7 cells in two groupswere detected. Results： Compared with adjacent tissue or MCF-10A cells, the relative expression levels of miR-367 in breast cancer tissues and MCF-7 cells were［收稿日期］2019-00-00［基金项目］

［作者简介］

四川省教育厅科研项目资助课题（16ZB0480）；四川省攀枝花市科技局科技计划项目资助课题（2015CY-S-33）周 春（1974 — ）,女，四川省射洪市人，讲师，医学硕士，主要从事普外科疾病基础和临床方面的研究。周 春，讲师（Tel： 0812-3370556, E-mail： zhouchunll2@126.com）［通信作者］

13吉林大学学报(医学版) 第45卷 第6期2019年11月significantly increased (P<0. 01). Compared with negative control group, the relative expression level of miR-367in the MCF-7 cells, the cell viability, the number of colonies, the positive expression rate of Ki67, the rate of cellwound healing and the number of invasive cells in miR-367-inhibitor group were significantly decreased (P<0. 01),

and the relative expression level of KLF4 was significantly increased (P<0. 01) ； compared with positive controlgroup, the relative expression level of miR-367 in the MCF-7cells, the number of colonies, rates of cell wound

healing and numberof invasive cells in miR-367-mimic group were significantly increased (P<0. 01), andthe

relative expression levelof KLF4 was significantly decreased (P<0. 01). Conclusion： miR-367 promotes the proliferation, migration and invasion of MCF-7 cells, and the mechanism may be related to the inhibition ofKLF4

expression.KEYWORDS microRNA-367 ； Kruppel factor 4 ； breast neoplasms； cell proliferation； migration； invasion由于饮食结构、生活方式、相关环境因素和 生化因素的变化，近年来乳腺癌的患病率有所增 加B。目前，乳腺癌已成为女性癌症相关死亡的重

上皮MCF-10A细胞系均购自南京凯基生物公司。 蛋白酶抑制剂和细胞裂解试剂均购自南京凯基生物

公司，胎牛血清购自美国Gibco公司，DMEM培 养基购自美国HyClone公司，RNeasy Mini试剂

要原因\"勺。据报道肿瘤的转移和快速生长加速 了乳腺癌患者的死亡过程。因此，寻找与转移和增 殖相关的分子标记物有助于提高患者的诊断成功 率，并为乳腺癌患者提供可能的治疗靶点。研究山 表明微小RNA (microRNA, miRNA)的失调在

盒、QuantiTect逆转录试剂盒和SYBR Green

PCR Master Mix试剂盒均购自美国 Applied

Biosystems公司，CCK-8试剂盒购自美国Biotool

公司，Kriippel 样因子 4 (Kruppel factor 4,

肿瘤的发生发展中起重要作用。miR-367是众多 KLF4)和GAPDH抗体均购自美国Bioworld公 司，Ki67抗体购自美国Abeam公司，miR-367-

miRNA家族中的一员，而关于miR-367与乳腺癌

关系的报道较少，目前只有1篇研究归表明：与乳

mimic、miR-367-inhibitor 和阴性对照 miR-NC 均

购自广州锐博生物公司，Lipofectamine 2000试剂 购自美国Invitrogen公司。Elx800型多功能酶标

腺癌MCF-7细胞比较，MCF-7细胞分化而来的球 囊中miR-367的表达水平明显降低，这种球囊与

肿瘤细胞的干性密切相关卩词,提示miR-367可能 仪购自美国Bio-Tek公司，ABI 7300型实时荧光 定量PCR系统购自美国AppliedBiosystems公司，

与乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力有关。

miR-367在肺小细胞肺癌皿］、肾细胞癌血和肝 癌【词等肿瘤组织中的表达水平呈特异性升高，发

挥促癌作用；而在胃癌口口组织中呈低表达，发挥 抑癌作用，说明miR-367在不同肿瘤中表达模式

IX 53型倒置荧光显微镜购自日本Olympus公司。1. 2 细胞培养 人乳腺癌MCF-7细胞系和正常 乳腺MCF-10A细胞系接种于含有10%胎牛血清和

1%青链霉素的DMEM培养基中，在37°C、 5 % CO的细胞孵育箱中培养。1. 3 RT-qPCR法检测乳腺癌组织、癌旁组织、

和潜在作用不同。本研究探讨miR-367对乳腺癌

MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及潜在的

机制，旨在为miR-367应用于乳腺癌诊断和治疗

MCF-7 细胞和 MCF-10A 细胞中 miR-367 mRNA

表达水平 使用RNeasy Mini试剂盒从组织和细

提供新的依据。1材料与方法胞中提取总RNA,并采用分光光度计行总RNA

定量。取2 dg总RNA根据QuantiTect逆转录试 剂盒说明书步骤逆转录为cDNA。采用各样本

1. 1 组织样本、细胞、主要试剂和仪器 选取

2017年3月一2018年3月攀枝花学院附属医院行

肿瘤切除术的36例首次确诊且未进行过放化疗的

cDNA、miR-367 引物和 U6 引物根据 SYBR Green

PCR Master Mix试剂盒说明书的步骤进行qRT- PCR 反应。miR-367 引物：上游 5-TCCACCAC- CCAGTTGCTGTA-5',下游 5‘-CGAGCAATTG-

n-rn期乳腺癌患者(包括11例侵润性导管癌、 12例侵润性小叶癌、4例粘液腺癌、2例髓样癌、

3例管状癌、2例乳头状癌和2例混合型乳腺癌), 收集乳腺癌组织和距侵润边缘2 cm的癌旁组织， 其中癌旁组织经攀枝花学院附属医院病理科确认为 非癌变组织。人乳腺癌MCF-7细胞系和正常乳腺

CACTTTAGCAAT-5'；内参 U6 引物：上游 5- GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3',下 游 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。反

应结束后，miR-367以U6为内参，采用2一皿法

周 春，等.miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制1355进行量化分析。1. 4 MCF-7 细胞转染 miR-NC 或 miR-367-

inhibitor 将MCF-7细胞按照每5 X 105个接种于 12孔培养板中，待细胞贴壁后，更换无血清培养

基培养12h,然后根据转染试剂说明书步骤，使 用Lipofectamine 2000试剂进行辅助转染miR-NC

和miR-367-inhibitor0待细胞转染48 h后，收集

细胞并采用RT-qPCR法检测细胞中miR-367相对 表达量（方法同1.3）后，分别命名为阴性对照组

和 miR-367 敲减（miR-367-inhibitor）组。1. 5 CCK-8法检测 阴 性对照 组和 miR-367- inhibitor组MCF-7细胞活性 采用CCK-8法检测 阴性对照组和miR-367-inhibitor组MCF-7细胞活

性。分别取阴性对照组和miR-367-inhibitor组 MCF-7细胞，按照每孔2X10个细胞的密度接种

于含100 dL完全DMEM培养基的96孔板中，在

37°C、5%C0?条件下培养1〜4 d。待细胞达到培

养时间终点后，样品孔分别加入10 gL CCK-8溶 液并继续孵育2 h。在酶标仪上读取450 nm处的

吸光度（A）值。实验重复4次，以A （450）值 的平均值表示细胞活性。1. 6 集落形成实验检测阴性对照组和miR-367- inhibitor组MCF-7细胞集落数 分别将阴性对照 组和miR-367-inhibitor组MCF-7细胞按照每孔

500个细胞的密度接种在6孔板中，每5 d换液 1次，持续培养细胞15d。待培养结束后，将细胞

固定于75%甲醇中，在室温条件下采用0.2%结晶 紫染色5 min，并拍摄细胞图片。采用Image J图

像软件对每个视野下细胞集落进行计数。实验重复 4次，取细胞集落数的平均值。1. 7 免疫荧光法检测阴性对照组和miR-367- inhibitor组MCF-7细胞中Ki67阳性表达率 分别 将阴性对照组和miR-367-inhibitor组MCF-7细胞

固定在10%甲醛中40 min后，用5%牛血清封闭

1 h。然后在4°C的条件孵育Ki67 （1 : 1 000稀释）

过夜。采用PBS洗涤后，在37°C避光条件下孵育

二抗（1 : 400稀释）30 min。采用PBS洗涤后，

在室温、避光条件下用DAPI染核5min。处理结 束后，使用荧光显微镜观察细胞，各样品随机取

6个视野拍摄荧光图片。实验重复4次，使用

Image J图像软件分析拍摄图片的Ki67阳性细胞 数，计算Ki67阳性表达率。Ki67阳性表达率=

Ki67阳性细胞数/DAPI染色细胞数S100%。1. 8 划痕愈合实验检测阴性对照组和miR-367- inhibitor组MCF-7细胞划痕愈合率 分别将阴性

对照组和miR-367-inhibitor组MCF-7细胞接种于

12孔板中。待细胞形成单细胞层完全融合时，使

用移液管尖端沿孔直径刮擦细胞层，使形成一条直

线划痕。使用PBS洗除刮掉的细胞，然后更换完 全DMEM培养基继续培养24 h。在显微镜下拍摄 起始时间（0h）和培养24h时的细胞图片。实验

重复4次，使用Image J图像软件将划痕间隙距离

进行量化，计算各组细胞划痕愈合率。细胞划痕愈 合率=［划痕间隙距离（24 h）—划痕间隙距离

（Oh） /划痕间隙距离（Oh） S100%。1. 9 Transwell法检测阴性对照组和miR-367- inhibitor组 MCF-7细胞侵袭数 Transwell上室

（& 0 gm孔径）涂覆100 fiL按1：8稀释的基质 胶。待基质胶完全晾干后，用无血清含有

0. 2%BSA的DMEM培养基调整阴性对照组和

miR-367-inhibitor 组 MCF-7 细胞的密度至 5 X 1（0 mL-」，各样品分别接种100 gL细胞悬液。下 室加入600 gL含有10%胎牛血清的DMEM培养

基。细胞培养12h后，用棉签除去残留在上室上

表面上的非侵入细胞，下表面上的侵入性细胞固定 在75%甲醇中，然后在室温条件下用0.2%结晶紫 染色5min。使用显微镜观察，并随机拍摄6个视

野的细胞侵袭图片。实验重复4次，使用Image J 图像软件（v.1. 8.0版）分析拍摄图片的细胞侵袭

数。细胞侵袭数以每个视野下侵袭细胞数的平均值 表示。1. 10 MCF-7 细胞转染 miR-NC 或 miR-367-

mimic 对 MCF-7 细胞使用 Lipofectamine 2000

试剂辅助转染miR-NC和miR-367-mimic （方法同

1.4）。待细胞转染48 h后，收集细胞并采用RT- qPCR 法检测细胞中miR-367相对表达量（方法同

1. 3）后，分别命名为阴性对照组和miR-367过表 达（miR-367-mimic）组。1. 11 阴性对照组和miR-367-mimic组 MCF-7细

胞的细胞集落数、细胞划痕愈合率和细胞侵袭数检 测 分别取阴性对照组和miR-367-mimic组

MCF-7细胞，采用集落形成实验检测细胞集落数 （方法同1.6）；采用划痕愈合实验检测细胞划痕愈

合率（方法同1. 8）;采用Transwell法检测细胞侵

袭数（方法同1. 9）。1.12 蛋白印迹法检测 MCF-10A细胞和各组 MCF-7细胞中KLF4蛋白表达水平 分别收集

MCF-10A细胞和各组MCF-7细胞，然后加入含有1356吉林大学学报（医学版） 第45卷 第6期2019年11月1%蛋白酶抑制剂的细胞裂解试剂提取全细胞蛋白

质。在12%聚丙烯酰胺凝胶的条件下对全细胞蛋 白质进行电泳。将电泳分离的蛋白质转移到聚偏二 乙烯二氟化物膜上。用5%脱脂乳在37°C下封闭膜

40 min,然后在4°C的条件孵育KLF4抗体（1 :

2 000稀释）和GAPDH抗体（1 : 5 000稀释）过

夜。TBST洗膜后，室温条孵育过氧化物酶共聚的 抗IgG （1 : 5 000稀释）1 h。TBST洗膜后，采

用ECL化学显影发光液使得目的蛋白条带形象化， 并从ImageQuant LAS500型多功能凝胶成像系统

获得图像。实验重复4次,使用ImageJ图像软件

（v.1. 8.0版）分析图像的目的条带灰度值，并以 GAPDH条带的灰度值为对照，对目的条带灰度值 进行量化分析。KLF4蛋白表达水平=实验组

（KLF4灰度值/GAPDH灰度值）/阴性对照组

（KLF4灰度值/GAPDH灰度值）S100%。1.13 统计学分析 采用SPSS 19. 0统计软件进

行统计学分析。乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7 细胞和 MCF-10A细胞中miR-367 mRNA表达水

平、各组 MCF-7细胞中miR-367 mRNA表达水 平、A （450）值、细胞集落数、Ki67阳性表达 率、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数和KLF4蛋白表 达水平均以匚士 s表示，组间比较采用t检验。以

P<0. 05为差异有统计学意义。2结果2. 1 乳腺癌组织和 MCF-7细胞中miR-367相对

表达水平 与癌旁组织比较，乳腺癌组织中

miR-367 mRNA表达水平明显升高（P<0. 01）；

与MCF-10A细胞比较，MCF-7细胞中miR-367

mRNA表达水平明显升高（P<0. 01） 见图1。2. 2 阴性对照组和 miR-367-inhibitor 组 MCF-7

细胞中miR-367 mRNA表达水平、细胞活性、细 胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率和

细胞侵袭数 与阴性对照组比较，miR-367-

inhibitor 组 MCF-7 细胞中 miR-367 mRNA 表达水

平（图2）、细胞活性（图3）、细胞集落数（图

4）、Ki67阳性细胞率［图5 （插页五）和6）、细

胞划痕愈合率（图7）和细胞侵袭数［图8 （插页五）和9］均明显降低（P<0. 01）2. 3 阴性对照组和miR-367-mimic组 MCF-7细

胞的miR-367 mRNA表达水平、细胞集落数、细

胞划痕愈合率和细胞侵袭数与阴性对照组比较，

miR-367-mimic 组 MCF-7 细胞中 miR-367 mRNA表达水平（图10）、细胞集落数（图11）、细胞划 痕愈合率（图12）和细胞侵袭数［图13和14 （插 页五）均明显升高（P<0. 01）A： n=36PV0. 01 p$ adjacent tissue； B：九=4, * PVO. 01 vs MCF-10Ace's.图1 乳腺癌组织(A)和MCF-7细胞(B)中miR-367 mRNA 表达水平Fig. 1 Expression levels of miR-367 mRNA in breast cancer

tissue(A) and MCF-7 cells(B)“ PV0. 01 ps negative control group.图2 阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞中 miR-367 mRNA表达水平Fig. 2 Expression levels of miR-367 mRNA in MCF-7 cells

in negative control group and miR-367-inhibitor group周 春，等.miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制1357Negative control group

miR-367-inhibitor group*ogsvo,5

0

o

12

3

4Time G/d)n=4, \" PV0. 01 us negative control group.图3 阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞活性Fig. 3 Viabilities of MCF-7 cells in negative control group“ PV0. 01 ps negative control group.图4阴性对照组和mR-367-inhibitor组MCF-7细胞集落数Fig. 4

Number of colonies of MCF-7 cells in negativecontrol group and miR-367-inhibitor group1: Negative control group； 2: miR-367-inhibtor group, n = 4，

“ PV0. 01 ps negative control group.图6 阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞中 K167阳性表达率Fig. 6 Positive expression rates of Ki67 in MCF-7cells innegative control group and miR-367-inhibitor groupNegative control group piiR・ 367-inhibitor groupA:Diagram of wound healing；B： Histogram of wound healing rate；

1: Negative control group； 2: miR-367-inhibtor group, n = 4,

“ PV0. 01 ps negative control group.图7 阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞划痕愈合情况(A)和划痕愈合率(B)Fig. 7 Wound healing (A) and wound healing rates(B) of MCF-7 cells in negative control group and miR-3 6 7-inhibitor

group1 21: Negative control group； 2: miR-367-inhibtor group, n = 4，“ PVO. 01 ps negative control group.图9阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞侵袭数Fig. 9

Number of invasive MCF-7 cells in negative controlgroup and m^R-367-inhibitor group1358吉林大学学报（医学版） 第45卷 第6期2019年11月jo RA«

uossajdxm1 21:Negative control group；2 :miR-367-mimic group.血=4, * PVO. 01

vs negative control group.图10 阴性对照组和miR-367-mimic组MCF-7细胞中

miR-367 mRNA表达水平Fig. 10 Expression levels of miR-367 mRNA in MCF-7cells in negative control group and miR-367-mimic group*丄

A

ucco Jc

JuqulnN1:Negative control group；2：miR-367-mimic group. v=4, * PV0. 01 us negative control group.图11阴性对照组和miR-367-mimic组MCF-7细胞集落数

Fig. 11 Number of colonies of MCF-7 cells in negative control group and miR-367-mimic group2. 4 各组 MCF-10A细胞和 MCF-7细胞中KLF4

蛋白表达水平 与MCF10A细胞比较，MCF-7细

胞中KLF4蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；

与阴性对照组比较，miR-367-inhibitor组MCF-7 细胞中KLF4蛋白表达水平明显增加（P<0. 01）,

而miR-367-mimic组 MCF-7细胞中KLF4蛋白表 达水平明显降低（P<0. 01）见图15〜17。3讨论乳腺癌是全世界女性中最常见的肿瘤，其发病 率和死亡率均占据女性肿瘤中首位⑺。乳腺癌细胞

的高速增殖和转移是乳腺癌预后不良的重要原Negative control groupmiR-367-inhibitor group《

2

兰花启

puneM1: Negative control group；2 ：miR-367-mimic group. v=4, * PV0. 01 ■vs negative control group.图12阴性对照组和miR-367-mimic组MCF-7细胞划痕愈 合情况(A)和细胞划痕愈合率(B)Fig. 12 Wound healing (A) andwound healing rates (B) ofMCF-7cells in negative control group and miR-367-mimicgroup1 21:Negative control group；：miR-367-mimic group. v=4, * PV0. 01 vs

negative control group.图13阴性对照组和miR-367-mimic组MCF-7细胞侵袭数

Fig. 13 Number of invasive MCF-7 cells in negative control

group and miR-367-mimic group周 春，等.miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制1359Lane 1: MCF-10A cells ； Lane 2 : MCF-7 cells ； 1: MCF-10A cells ； 2： MCF-7 cells. v= 4，* P<0. 01

MCF-10AceHs.图15 MCF-7和MCF-10A细胞中KLF4蛋白表达电泳图

(A)和表达水平直条图(B)Fig. 15 Electrophoregarm of expressions (A) and histogram(B)of expression levelsofKLF4 protein inMCF-7 cells andMCF-10AcellsLane 1: Negative control group; Lane 2: miR-367-inhibtor group. 1:Negatie control group； 2： miR-367-inhibitor group.九=4, * PV 0. 01 ps negative control group.图16 阴性对照组和miR-367-mhibitor组MCF-7细胞中KLF4蛋白表达电泳图(A)和表达水平直条图(B)Fig. 16 Electrophoregram of expressions (A) and histogram(B) ofexpression levels of KLF4 protein in MCF-7 cells innegative control group and miR-3 6 7-inhibitor groupKLF450 000AQAU-

u.2ssaldxu UAHCOM

2BLane 1: Negative control group； Lane 2: miR-367-mimic group； 1: Negative control group；2 ：miR-367-mimic group. v=4, * PV0. 01 us negative control group.图17 阴性对照组和miR-367-mimic组MCF-7细胞中

KLF4蛋白表达电泳图(A)和表达水平直条图(B)Fig. 17 Electrophoregram of expressions(A) and histogram(B) of expression levels ofKLF4 protein in MCF-7 cells in

negative control group and miR-367-mimic group因〔T。因此，寻找与乳腺癌细胞转移和增殖相关 的新型分子标记对于诊断与治疗乳腺癌具有重要意

义。miRNAs在肿瘤细胞增殖和转移中发挥重要作 用⑺。研究 显示：miR367在多数肿瘤细胞中 发挥促癌作用，而在胃癌发挥抑癌作用，提示

miR-367在不同肿瘤细胞中的作用具有差异性，而 miR-367对乳腺癌的作用及其机制尚未阐明。本研

究通过RT-qPCR分析表明：miR-367在乳腺癌组 织和MCF-7细胞中呈高表达；进一步的研究显示:

敲减miR-367可抑制MCF-7细胞增殖、侵袭和迁

移；而过表达miR-367则可促进MCF-7细胞增

殖、侵袭和迁移。本研究结果提示：miR-367在乳

腺癌中发挥促癌作用，而抑制miR-367表达则具 有一定的治疗作用。miRNA是通过结合靶基因3'UTR区域，从 而影响靶基因转录后生物学效应⑺。靶基因在 线软件预测KLF4是miR-367的1个靶基因。已有

1360吉林大学学报（医学版） 第45卷 第6期2019年11月关于KLF4在乳腺癌组织中表达的研究口5-询表明：

KLF4在乳腺癌组织中低表达，敲除KLF4表达可 促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭；过表

达KLF4可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、 迁移和侵袭，提示KLF4表达负乳腺癌进展。

且已有研究「刀证实了 KLF4是miR-367的一个靶 基因。本研究通过 Western blotting实验证实了

miR-367可以负KLF4表达。上述研究结果说

明：miR-367对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和 侵袭的影响可能是通过负靶基因KLF4来实现 的。综上所述，miR-367对乳腺癌MCF-7细胞发 挥促癌作用，而下调miR-367则能抑制MCF-7细

胞增殖、迁移和侵袭；miR-367这一作用可能与负 靶基因KLF4有关。[参考文献][1] DESANTISC, MA J, BRYAN L, et al. Breast cancer

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A： Control group； B： Pulpitis 1 d group； C： Pulpitis 3 d group ； D： Pulpitis 5 d group.图1各组大鼠牙髓组织形态表观(HE,X200) Fig. 1 Morphology of pulp tissue of rats in various groups (HE, X200)(seen on page 1336 in paragraph)图5 阴性对照组和miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中Ki67表达情 况(免疫荧光,X200)Fig. 5 Expressions of Ki67 in MCF-7 cells in negative control group( A) and miR-3 67-inhibitor group (B) (Immunofluorescence > X 200) (seen on page 1356 in paragraph)图 8 阴性对照组（A〉和 miR-367-inhibitor 组（E〉MCF-7 细 图14阴性对照组（A〉和miR-367-mimic组（B）MCF-7细胞的胞侵袭形态表现（结晶紫,X200）侵袭情况（结晶紫,X200）Fig. 8 Morphology of invasion of MCF-7 cells in negative Fig. 14 Invasion of MCF-7 cells in negative control group (A) control group (A) and miR-3 6 7-inhibitor group (B) (Crystal and miR-367-mimic group (B) (Crystal violet, X 200)

(seen on page 1356 in paragraph)violet, X 200)(seen on page 1356 in paragraph)