０ｌ３年９月第７卷第１７期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃ ・临床论著・ 慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义 龚希平周镇先黄菁黄玲 应用免疫荧光法（Ｉ ）检测 【摘要】 目的和 探讨慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义。方法２３０例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体，并研究自身抗体与ＨＣＶ ＲＮＡ、肝硬化发生率、年龄、性别以及 的关系。结果２３０例慢性丙型肝炎患者中有９５例至少有１项自身抗体阳性，总阳性率为４１．５％， 明显高于健康对照组２．５％，两组比较Ｐ＜０．０１，差异有统计学意义。ＨＣＶＲＮＡ阳性组与ＨＣＶＲＮＡ阴性组 自身抗体的检出率差异显著（Ｐ＜０．０５）。自身抗体阳性组中丙型肝炎肝硬化发生率（６５／９５，６８．４％）明显 高于自身抗体阴性组（４６／１２５，３６．８％）。而且年龄ｔ＞４０岁以上的患者发生肝硬化率更高，两组间比较， Ｐ＜０．０５，差异有统计学意义。结论慢性丙型肝炎患者中较为普遍存在自身免疫现象，且自身抗体的检出 率与患者的年龄和肝硬化发生率明显相关，在丙型肝炎的常规诊疗中应加强检测自身抗体，对于慢性丙型 肝炎患者的治疗具有较强的指导意义。 【关键词】 肝炎，丙型，慢性； 肝炎病毒属； 自身抗体； 肝硬化 Ｃｆｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ａｕｔｏ—ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ＧＯＮＧＸｉ－ｐｉｎｇ，ＺＨＯＵＺｈｅｎ－ｘｉａｎ，ＨＵＡＮＧＪｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＬｉｎｇ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， ＮａｎｊｉｎｇＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００３，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＯＵＺｈｅｎ－ｘｉａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｚｚｘ０４１ ７＠１２６．ｃｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒ ２３０ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｉｓｔ Ｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｄｅｔｅｃｔ ｓｅｒｕｍ ａｕｔｏ－ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｕｃｅ（ＨＦ）ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｃｏ珊ｐａｒｅ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ、）ｌ，ｉｔｈ ｔｈｅ ＨＣＶ ＲＮ＆ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ａｇｅ，ｇｅｎｄｅｒ， ｎｄ ａＡＩ ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｏｕｔ ｏｆｔｈｅ ２３０ ｃａｓｅｓ ｏｆｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｉｔｓ Ｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ．９５ ｃａｓｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ａｔ １ｅａｓｔ ｏｎｅ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｏｓｉｉｔｖｅ，ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｐｏｓｉｉｔｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ４１．５％，ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｈｅ ｈｅａｌｔｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（２．５％，Ｐ＜Ｏ．０１）． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆａｎｔｃ ｉｆｄｅｒｎｃｅ（ｅＰ＜０．０５）ｉｎ ｄｃｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ａｕｔｏ－ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＣＶ ＲＮＡ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＨＣＶＲＮＡ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｉｎ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ（６５／９５，６８．４％）ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ（４６／１４８，３６．８％）（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ＞４０ ｙｅａｒｓ ｏｌｄ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｈｅｒｇ ｉｎ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｏｕｐ ｇｔｈａｎ ｉｎ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ （尸＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｈｅｎｏｍｅｎａ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｐｒｅｖａｌｅｎｔ ｉｎ ｐａｉｔｅｎｔｓ ｍ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｉｔｓ Ｃ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏ—ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔ＇ｓ ａｇｅ ａｎｄ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅａｓ￣ｅｍｅｍ ｏｆ ａｕｔｏ—ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔｉｔｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｈｏｌｄｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｇｕｉｄｉｎｇ ｍｅａｎｉｎｇ ｏｒ ｆｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅｍｍｅｍ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｈｅｐａｔｉｉｔｓ Ｃ，ｃｈｒｏｎｉｃ；Ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓ；Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；Ｌｉｖｅｒ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ 丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染严重威胁人类健康， 健康人血清中抗核抗体（ＡＮＡ）、抗平滑肌抗体 （ＡＳＭＡ）、抗线粒体抗体（ＡＭＡ）、肝肾微粒体抗体 （ＬＫＭ）的检测，并比较其与ＡＬＴ、ＨＣＶ ＲＮＡ、患者 自１９８９年Ｅｓｔｅｒｂａｎ等［１－２］首次在自身免疫性肝炎患者 血清中检测出抗ＨＣＶ以来，ＨＣＶ感染与自身免疫的 关系，已越来越受到人们广泛关注。对ＨＣＶ感染与自 年龄、性别以及肝硬化发生率的关系，评价自身抗体 在丙型肝炎诊疗中的作用。 资料与方法 一身免疫关系的研究，有助于ＨＣＶ发病机制的进一步认 识，对于丙型肝炎的临床治疗和方案的选择具有重要 的意义。本文通过对２３０例慢性丙型肝炎患者和８Ｏ例 、研究对象 ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—０７８５．２０１３．１７．０１４ 选择２３０例慢性丙型肝炎患者均为我院２００９年４ 月至２０１２年１２月收治的住院患者。其中男１３１例， 基金项目：南京市科学技术厅社会发展项目（２０１２０１０６６） 作者单位：２１０００３南京市第二医院检验科 通讯作者：周镇先，Ｅｍａｉｌ：ｚｚｘ０４１７＠１２６．ｔｏｍ 女９９例，年龄２１～７０岁，平均（４６．６￣１５．４）岁。临 １３年９月第７卷第１７期Ｃｌａｉｎ Ｊ 床诊断均符合２００４中华医学会肝病学、中华医学会传 染病与寄生虫病学分会制定的诊断标准。 二、检测试剂 ＡＳＭＡ、ＡＭＡ、ＡＮＡ、ＬＫＭ试剂均购自德国欧 阳性率的比较：２３０例慢性丙型肝炎患者血清检出 ９５例自身抗体阳性，其中４患者自身抗体出现重叠， 总阳性率为４１．３％，其中ＡＮＡ阳性６５例（２８．３％）， ＡＳＭＡ阳性３２例（１３．９％），ＡＭＡ阳性１例（０．４％）， ＬＫＭ阳性３例（１．３％），以ＡＮＡ的阳性检出率最高， 蒙（ＥＵＲｏＩＭ 一）免疫试剂的自身抗体试剂盒；抗 ＨＣＶ购自北京万泰生物制品有限公司，ＨＣＶ ＲＮＡ核 限公司。 而８０例健康对照组的检出ＡＭＡ阳性２例，其余结果 均为阴性，阳性率为２．５％。对两组ＡＮＡ、ＡＳＭＡ以 及总阳性率分别进行比较，差异有非常显著的统计学 意义（分别为ｚ２＝５．６６，Ｐ＜０．０１； ＝２８．８８，Ｐ＜０．０１； ＝１５．５８，Ｐ＜０．０１），其结果见表１。 酸扩增荧光检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有 三、检测方法 １．抗ＨＣＶ检测：采用北京万泰生物药业股份有 限公司产的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒，严格按照 ２．慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检出率与 ＨＣＶ ＲＮＡ的关系：见表２。２３０例慢性丙型肝炎患者 中有１３１例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性，９９例ＨＣＶ ＲＮＡ阴性， 说明书操作，进行抗ＨＣＶ检测，临界值＝阳性对照孔 Ａ均值＋０．１２，≥临界值为抗ＨＣＶ阳性。＜临界值为 抗ＨＣＶ阴性。 在ＨＣＶ ＲＮＡ阳性组中，检出６９例，７１项次自身抗体 阳性（其中重叠２例），其总检出率为５２．７％，而ＨＣＶ ＲＮＡ阴性组中，检出２６例，总检出率为２６．６％，两者 总检出率比较，ＨＣＶ ＲＮＡ阳性组的阳性率明显高于 ２．ＰＣＲ－ＨＣＶ ＲＮＡ的检测：采用中山大学达安基 因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒， 使用实时荧光定量ＰＣＲ系统（ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ， 美国ＡＢＩ７５００基因扩增仪）检测ＨＣＶ ＲＮＡ。 ＨＣＶ ＲＮＡ阴性组（ ＝Ｏ．９２，Ｐ＜０．０５）。 ３．自身抗体与患者性别、年龄、肝损害以及肝硬 化的关系：见表３。９５例自身抗体阳性的丙型肝炎患 者中有肝硬化６５例（６８．４％），≥４０岁后，肝硬化的发 生比例逐年上升，≥６０岁以后，肝硬化比例可高达８７．５％。 ９５例自身抗体阳性的丙型肝炎患者中男性为２７ 例，女性为６８例，女性患者大约是男性患者的３倍， 这９５例中肝硬化患者共６５例，女性患者为４６例，男 性１９例，同样也为３倍左右，表３显示两组比较，女 ３．自身抗体谱的检测：采用德国欧蒙医学实验诊 断股份公司（ＥｕＲＯⅡｖＩＭ【 ）的欧蒙斑点法检测试剂 盒采用间接免疫荧光法ＵＩＦ），以生物薄片马赛克技 术制各的冰冻细胞、组织切片为抗原基质与待测血清 结合，加入荧光素标记物抗人免疫球蛋白，测定患者 血清ＡＮＡ、ＡＭＡ、ＡＳＭＡ，严格按说明书操作及判断 结果，细胞组织出现特异性绿色荧光为阳性，未见荧 光反应者阴性。 四、统计学分析 采用ＳＰＳＳ １ １．５统计软件进行相关的统计学分析， 性患者比男性患者更易罹患自身免疫性肝炎（）ｒ２： ０．９４，Ｐ＜０．０５）。 计数资料用例数和％表示，计量资料以均数±标准差 １３５例自身抗体阴性组中有肝硬化４６例（３６．８％）， ≥４０岁后，肝硬化的发生比例，同样也是逐年增高。 （ ±Ｓ）表示，组间比较采用成组设计的ｔ检验，计数 资料比较采用 检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 结 果 但是两组的肝硬化发生率比较，差异有统计学意义 （ｚ２＝６８，Ｐ＜０．０１）。 ．９５例自身免疫抗体阳性组丙型肝炎患者的肝损害 程度大于阴性组，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．００１）。 １．慢性丙型肝炎患者与健康对照组自身抗体检测 表１ 慢性丙型肝炎与健康人血清各种自身抗体检测结果【例，（％）】 中华临床医师杂志ｆ电子版）２０１３年９月第７卷第ｌ７期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｍｆＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ）。Ｓｅｌａｔｅｍｂｅｒ １．２０１３．Ｖｏ１．７，Ｎｏ．１７ 表３ 自身抗体阳性与自身抗体阴性的丙型肝炎患者年龄、性别及肝硬化情况比较 组别 例数 例数 男／女 ＡＬＴ（ＩＵ／ｍｌ，２：ｉ：ｓ） 肝硬化患者【例， ）］ ３（２５．０１ ２０（６８．７１ ２８（８０．Ｏ１ １４（８７．５） 自身抗体阳性组 自身抗体阴性组 ５（２２．７、 １３（２７．７） １８（４１．８１ １Ｏｆ４３．５１ 一 一 讨 一 一 论 损伤，使病隋迁延不愈，最终出现肝硬化。 我们检查了２３０例慢性丙型肝炎患者中有１３１例 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性，９９例ＨＣＶ ＲＮＡ阴性。在ＨＣＶ ＲＮＡ 阳性组中，自身抗体的阳性检出率明显高于阴性组 （ ＝０．９２，Ｐ＜０．０５），提示有ＨＣＶ病毒活动的患者 自身抗体检出率高。在自身免疫抗体阳性组中，≥４０ 岁患者，患者的肝硬化率高达近７０％，随着年龄逐渐 增大，肝硬化的发生率也不断增高，≥６０岁患者可高 达近８７％。提示肝硬化与患者年龄密切相关，年龄大 岑岑抄岑 咨 丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，ＨＣＶ慢 ∞如∞∞加如∞ ＜＜ ＜＜ 性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者 岑岁 岑岑 可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（ＨＣＣ），对患者的健 康和生命危害极大［３－４１。由于许多抗ＨＣＶ抗体阳性的 患者有自身免疫抗体出现，而自身抗体患者中又出现 ＨＣＶ感染者，自身抗体与ＨＣＶ感染之间的关系日益 受到关注，同时也使诊断和治疗变得复杂。因此国内 外学者在这一方面进行了大量研究工作，慢性丙型肝 炎患者中自身抗体的检出率各种报道不尽相同，本研 究显示：２３０例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的总 检出率为４１．３％（９５／２３０），而健康对照组仅为２．５％ （２／８０），相比差异有统计学意义（ ：１５．８，Ｐ＜０．０１）； 其中ＡＮＡ、ＡＳＭＡ较正常对照组差异有统计学意义 者同时有２种抗体同时存在，提示自身免疫反应是 十一十一＋一＋一十一＋一＋一＋一 者，病程亦长，迁延不愈，最终出现肝硬化，显然肝 损害是发生肝硬化的直接原因［６甚】。 本研究发现自身抗体的阳性率女性高于男性大约 ３倍，与国内许多报道的自身抗体的阳性率无性别差异 不一致，而与女性罹忠其他自身免疫性疾病（系统性 红斑狼疮，系统性脉管炎，硬皮病，类风湿性关节炎 激素水平有关。因此在临床上重视ＨＣＶ感染的女性患 （ ＝－５．６６，Ｐ＜０．０５；Ｚ＝２８．８８，尸＜０．０１），且部分患 等）概率是男性的３～５倍大致相同，这可能与女性的 ＆ ＨＣＶ感染的普遍现象。 本研究发现大爹慢性丙型肝炎患者均有不同程度 ＡＬＴ波动（６７￣３４０ ＩＵ／ｍ１），显示这些患者存在不同 程度肝损害，这样的肝损害，是ＨＣＶ所致的肝损害。 Ｏｂｅｒｍａｙｅｒ．Ｓｔｒａｕｂ等Ｌ５Ｊ认为：ＨＣＶ可导致肝细胞的细 者，注意监测患者的自身免疫抗体【７］。 对丙型肝炎患者血清进行自身抗体检测，对认识 疾病有着重要的临床意义，可是自身免疫性疾病（包 括自身免疫性肝炎）与慢性丙型肝炎在治疗原则上截 然不同，直接决定着丙型肝炎患者的治疗方向，意义 重大。如不恰当地使用干扰素治疗可使自身免疫性疾 病病情恶化；而盲目地应用免疫抑制剂又可加重病毒 血症，所以正确区分合并ｒｔｃｖ感染的自身免疫性疾病 和伴有自身免疫现象的丙型肝炎显得尤为重要。 一 胞膜通透性增加或细胞膜抗原成分发生变异，肝细胞 内的各种细胞器流出胞外，诱发产生自身抗体，这种 自身免疫性疾病是继发的，即自身免疫性疾病的启动 因子是病毒感染。而Ｖｅｎｔｏ等的研究也证实了肝损伤 机制，与抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ＡＤＣＣ）作甩 有关。抗原与抗体结合的复合物表达于细胞表面，ＮＫ 细胞通过Ｆｃ受体和抗原．抗体复合物相互作用从而引 起肝细胞的损伤。自身抗体的持续出现，不断加重肝 （本文参考文献见光盘） （收稿日期：２０１３—０７．３１） （本文编辑：马超） 龚希平，周镇先，黄菁，等慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义［Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１３，７（１７）：７７２１—７７２３
