江西农业学报２０１５，２７（５）：８７￣８９ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ 咖啡因在小鼠中的抗凝血作用研究 许博 ，王书芬 ，李芳 ，张盼 ，郝淑关。，方崇业 ，盛军 ， （１．云南农业大学普洱茶学教育部重点实验室，云南昆明６５０２０１ ２．云南省茶深加工工程技术研究中心，云南昆明６５０２０１；３．云南大学，云南昆明６５００９１） 摘要：研究了咖啡因灌胃对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠尾出血时间（ＢＴ）、凝血时间（ＣＴ）、活化部分凝血活酶时间（ＡＰＴｒ）、凝血酶 原时间（ＰＴ）和凝血酶时间（１Ｔ）等的影响。结果表明：咖啡因显著地延长了小鼠的体内和体外凝血时间，但对ＡＰ１Ｔｒ、ＰＴ、 １Ｔｒ值，以及纤维蛋白原含量、ＰＴ活性和ＰＴ国际标准化比率均没有显著的影响。 关键词：咖啡因；小鼠；尾出血时间；凝血时间 中图分类号：￥８６５．１３文献标志码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１５）０５—００８７—０３ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｆｆｅｉｎｅ ｏｎ Ｍｉｃｅ ＸＵ Ｂｏ ｒ，ＷＡＮＧ Ｓｈｕ—ｆｅｎ ，ＬＩ Ｆａｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｐａｎ ， ＨＡＯ Ｓｈｕ—ｍｅｉ。ＦＡＮＧ Ｃｈｏｎｇ－ｙｅ ・ ，ＳＨＥＮＧ Ｊｕｎ ＇ ，（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｕ—ｅｒｈ Ｔｅａ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ，Ｙｕｎｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｙｕｎｎａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔｅａ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９１，Ｃｈｉ－ ｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｇａｖａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ（ＢＴ），ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ（ＣＴ），ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐａｒｔｉｌａ ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｔｉｍｅ（ＡＰｑＴ），ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ（ＰＴ）ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ（Ｔｒ）ｏｆ ＢＡＬＢ／ｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｓｉｇ— ｎｉｉｆｅａｎｆｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｏｔｈ ＢＴ ａｎｄ ＣＴ ｏｆ ｍｉｃｅ，ｂｕｔ ｉｔ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｎ ＡＰ１Ｔｒ，ＰＴ ａｎｄ ＴＦ ｖａｌｕｅｓ，ｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ， ＰＴ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ＰＴ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｒａｔｉｏ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃａｆｆｅｉｎｅ；Ｍｉｃｅ；Ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ；Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ 近年来随着人们生活水平的不断提高，血栓问题 逐渐成为影响人们健康的一大杀手，血栓往往会 造成不可逆转的严重后果，致残甚至致死 。在美国， 静脉血栓栓塞（ＶＴＥ）的发生率高达０．１％；每年新增病 例超过２０万，其中的３０％在发病３０ ｄ之内死亡，２０％ 由于肺栓塞（ＰＥ）猝死 。目前抗血栓药物的研发仍 然以抗凝血剂为主要方向。 咖啡因（ｃａｆｆｅｉｎｅ），化学式为Ｃ Ｈ 。Ｎ ０ ，是一种具 蛋白原（ＦＩＢ）含量、ＰＴ活性和ＰＴ国际标准化比率的影 响，揭示了咖啡因可能用于抗凝血和抗血栓。 ｌ材料与方法 １．１实验材料 清洁级健康６～８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３２只，体 重ｌ８～２２ ｇ，由昆明医科大学提供。咖啡因购自阿拉丁 公司。 １．２主要仪器和试剂 有甲基黄嘌呤结构的生物碱，广泛地存在于咖啡果、茶 叶等植物的豆、叶子和果实中。咖啡因是一种中枢神 ＴＤ５Ａ离心机（长沙英泰仪器有限公司）、电子天 平（ＤＥＮＶＥＲ公司）、秒表及一次性使用血样采集容器 经的刺激剂，适量服用具有缓解疲劳、保持清醒、增强 记忆和加快反应速度的作用，但长期大量服用有成瘾 的可能性 Ｊ。咖啡因对动物和人体具有很多正面和 负面的功效，人摄入咖啡因对健康的利弊也一直存在 争议 Ｊ，但关于咖啡因对凝血的影响目前尚无报道。 本研究测定了ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的尾出血时间（ＢＴ）和 （湖南省浏阳市医用仪具厂）、ＳＦ一８０００全自动凝血测 试仪（北京赛科希德科技发展有限公司）。ＡＰＴＴ测定 试剂盒、ＰＴ测定试剂盒、１Ｙｒ测定试剂盒、ＦＩＢ含量测定 试剂盒均由北京赛科希德科技有限公司提供。 １．３实验设计 １．３．１ 动物分组在实验条件下给小鼠喂基础饲料７ 凝血时间（ＣＴ），明确了咖啡因对于小鼠的抗凝血作 用；并测定了咖啡因对小鼠的活化部分凝血活酶时间 （ＡＰＴＦ）、凝血酶原时间（ＰＴ）、凝血酶时间（ＴＩ＂）、纤维 ｄ后，将３２只小鼠随机分为４组，每组８只小鼠：空白 对照组（生理盐水）、咖啡因低剂量组（１０ ｍｓ／ｋｇ）、咖啡 因中剂量组（２０ ｍｇ／ｋｇ）和咖啡因高剂量组（４０ ｍｓ／ 收稿日期：２０１４—１０—１４ 作者简介：许博（１９８７一），女，河南安阳人，硕士，研究方向为茶叶功效及其分子机制。 通讯作者：方崇业。 ５期 许博等：咖啡因在小鼠中的抗凝血作用研究 ８９ 与毛细血管功能、血小板功能及各类凝血因子有关 。 本实验结果表明，咖啡因能明显延长小鼠的凝血时间 白原转化为凝胶状的纤维蛋白 Ｊ。本实验结果显示： 咖啡因的抗凝血作用与内源性凝血系统、外源性凝血 系统和纤维蛋白原均无关。 （图１）和尾出血时间（图２）。ＡＰＴＦ、ＰＴ、ＴＩ＂值和ＦＩＢ 含量这４项指标是通常医学上用来评价血液凝固系统 的止血功能的。ＡＰＴＴ反映内源性凝血系统的状态，ＰＴ 咖啡因本身是磷酸二酯酶３（ＰＤＥ３）的抑制剂 ， 而ＰＤＥ３的抑制剂具有舒张血管平滑肌、抗血小板凝聚 反映外源性凝血系统的状态，Ｔｒ反映血浆纤维蛋白原 转变为纤维蛋白的凝血状况，ＦＩＢ含量反映血浆中纤维 蛋白原的含量 。血液凝固的过程包括３个主要的阶 段：凝血酶原被激活、凝血酶原转化为凝血酶、纤维蛋 ７０ 和抗血栓的作用。因此在服用咖啡因后，咖啡因有短 暂的升高血压和加快血液流速的作用¨ 。咖啡因的 抗凝血作用可能与其本身是ＰＤＥ３的抑制剂有关，其机 理有待进一步研究证明。 ６Ｏ ５Ｏ ｌ 毫 营４Ｏ 颦３０ ２０ ｌ０ Ｏ 鬈 醐 ０ 对照 咖啡因 对照 咖啡凶 踌 蠖篮西 图４咖啡因对小鼠凝血酶时间和纤维蛋白原含量的影响 ０ Ｏ Ｏ 对照 咖啡因 对照 咖啡凶 图５咖啡因对小鼠ＰＴ活性和ＰＴ国际标准化比率的影响 王贤波等… 证明茶叶中的ＥＧＣＧ有抗凝血的作 用。本实验证明了茶叶中的另一主要成分咖啡因也有 ｈａｖｅ ｌｅｆｔ ｔｏ ｌｅａｒｎ，ａｎｄ ｗｈｙ ｗｅ ｓｈｏｕｌｄ ｗｏｒｒｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｅｉ Ｂｉｏｂｅｈａｖ Ｒｅｖ，２００９，３３（６）：７９３—８０６． 抗凝血的作用。茶叶本身具有调节血脂代谢和预防心 脑血管疾病的功能 ，这与其本身含有大量的ＥＧＣＧ ［６］史小莲，刘俊田，李西宽．水蛭免加热提取物抗凝血及抗血栓 作用［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００４，１５（２）：９５—９７． 和咖啡因都有关 。 参考文献： ［１］代莉莉．深静脉血栓形成的预防及护理进展［Ｊ］．实用护理杂 志，２００２，１８（２）：５５—５６． ［７］王学峰，王鸿利．血栓与止血的检测及应用［Ｍ］．上海：上海 世界图书出版公司，２００２：１６４—１８４． ［８］徐恒启，陈克利．国内抗凝血、抗血栓多糖的药理研究进展 ［Ｊ］．生物学杂志，２００５，２２（１）：ｌ４—１６． ［９］ＫｅｎｊｉＯ，ＪｕｎＫ．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆＰＤＥｓ ａｎｄｔｈｅｉｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒ— ｅｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，１００（３）：２７—３０． ［２］Ｈｅｉｔ Ｊ Ａ．Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ［１０］Ｆａｒａｇ Ｎ Ｈ，Ｗｈｉｔｓｅｔｔ Ｔ Ｌ，ＭｃＫｅｙ Ｂ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃａｆｆｅｉｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ｓｅｘ，ａｇｅ，ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｓｔａｔｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｗｏｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈ（Ｌａｒｅｈｍｔ），２０１０，１９（６）：１１７１—１１７６． ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２００８，２８（２８）： ３７０－３７２． ［３］Ａｎｇｅｌｕｃｃｉ Ｍ Ｅ，Ｃｅｓａｒｉｏ Ｃ，Ｈｉｍｉ Ｒ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｆｆｅｉｎｅ Ｏｉｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ｒａｔｓ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ［１１］王贤波，成浩，赵芸，等．茶叶中ＥＧＣＧ对小鼠抗凝血作用实 验研究［Ｊ］．茶叶科学，２０１１，３１（６）：５３２—５３６． ［Ｊ］．Ｂｒａｚ Ｊ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ，２００２，３５（１０）：１２０１—１２０８． ［４］Ｓｍｉｔ Ｈ Ｊ，Ｒｏｇｅｒｓ Ｐ Ｊ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆｌｏｗ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｏｎ ｅｏｇｎｉ— ｔｉｖｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｍｏｏｄ ａｎｄ ｔｈｉｓｔｒ ｉｎ ｌｏｗ ａｎｄ ｈｉｇｈｅｒ ｃａｆｆｅｉｎｅ ［１２］屈用函，邵宛芳，侯艳．普洱茶功效的研究进展及展望［Ｊ］． 思茅师范高等专科学校学报，２０１２，２６（１）：１０—１３． ［１３］宛晓春．茶叶生物化学［Ｍ］．北京：中国农业出版社， ２００８：３２０． ｃｏｎｓｕｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｓｙｅｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｂｅｒ１），２０００，１５２（２）： １６７－１７３． ［５］Ｔｅｍｐｌｅ Ｊ Ｔ．Ｃａｆｆｅｉｎｅ ｕｓｅ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ：ｗｈａｔ ｗｅ ｋｎｏｗ，ｗｈａｔ ｗｅ （责任编辑：黄荣华）
