ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２０１０ＶＯＬ．２１ ＮＯ．８ 时珍国医国药２０１０年第２１卷第８期 的微球具有更长的缓释时间。 ｆａｃｅｓ Ｂ：Ｂｉｏｉｎｔｅｆｆａｃｅｓ，２００９，７３（２）：２０７． ３．４．４温度对释放行为的影响在负载量一定的情况下，在２５ ［６］ Ｈａｓａｎｏｖｉｃ Ａ，Ｈｏｅｌｌｅｒ Ｓ，Ｖａｌｅｎｔａ Ｃ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｋｉｎ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ～３７￣Ｃ范围内研究温度对熊果苷体外释放行为的影响，结果如图 ｐｈｙｔｏｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏ． ９所示。可以看出，温度对熊果苷的释放行为稍有影响，温度越 ｔｒｏｐｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｕｒ ｏｆ ＤＰＰＣ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒ－ 高，释放率越高。这是因为较高的温度有利于分子的扩散。 … ｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００９，Ｉｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｕｎｃｏｒｒｅｃｔｅｄ Ｐｒｏｏｆ． ４结论 Ｍａｌａｆａｙａ ＰＢ，Ｓｉｌｖａ ＧＡ，Ｒｅｉｓ ＲＬ．Ｎａｔｕｒａｌ—ｏｒｉｇｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ 本实验采用超声乳化法选择油包水Ｗ／Ｏ乳液体系，以熊果 ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｐｐｌｉｃａ－ ｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２Ｏ０７，５９（４—５）：２０７． 苷为被包裹功效成分，成功制备了熊果苷／ＨＡ—ＡＤＨ微球，成球ｒ Ｒ］ 梁建军．仿生化妆品添加剂一透明质酸（续）［Ｊ］．化学世界， 性和分散性良好。微球载药量（ＤＬ％）为（８．３３±１．５２）％，包封 ２００７，４８（１）：６２． 率ＬＥ％为（６７．３７ ４－１．６４）％（ｎ＝５）。实验还对所制得的载药多『９］ 梁建军．仿生化妆品添加剂一透明质酸［Ｊ］．化学世界，２００６，４７ 孔微球的体外释放行为进行了研究。结果表明，熊果苷／ＨＡ— （１２）：７６３． ＡＤＨ微球对其有较好的缓释作用。微球粒径较大和负载量高时［１０］ 门学忠，康毅．ＨＡ皮肤补水的奥秘一透明质酸在化妆品中的应 具有较好的缓释效果，孔径对其释放行为也有一定影响，孔径大 用［Ｊ］．食品与药品，２００５，７（Ｏ１Ｂ）：４９． 的具有更快的释放速度；释放介质温度的变化对其释放行为影响Ｌ儿Ｊ Ｌｉａｎｇ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｈ，Ｔｉａｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅ￣ｉｅｓ 较小。 ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｑｕａｔｅｒｎｉｚｅｄ Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｗｉｔｈ Ｄｒｕｇ Ｌｏａｄｉｎｇ Ｃａｐａｅ一 与传统的化妆品配方相比，将多孔聚合物微球系统应用于化 ， ［Ｊ］．Ａｅｔａ Ｐｈｙｓｉｃｏ—Ｃｈｉｍｉｅａ Ｓｉｎｉｃａ，２００８，２４（２）：２２３． 妆品中，可以将其中的活性组分缓慢释放到皮肤表面，以达到长一 Ｐｒｉｃｅ ＲＤ，Ｂｅｒｒｙ ＭＧ，Ｎａｖｓａｒｉａ ＨＡ．Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｅ ａｃｉｄ：ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖｉｄｅｎｃｅ Ｉ Ｊ １．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ，Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ＆Ａｅｓ． 时间维持有效浓度、降低毒副作用等目的。另外，多孑Ｌ聚合物微 ｔｈｅｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，２００７，６０（１０）：１１１０． 球的透气性和保湿性，使它能够很好的与皮肤相容。研究微球结ｒ１３］ Ｌｉｕ Ｑ，Ｈｕａｎｇ Ｃ，ＩＪｌＪ０ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｎ—ｓｉｚｅｄ ｈｏｌｌｏｗ ｍｉ— 构、活性物性质和释放性能的基本规律对于指导化妆品用功效原 ｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｂｙ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔ—ＤＥＧＤＡ（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇ３ｙ— 料的制备，开发适合的透皮吸收缓释载体具有指导意义。 ｃｏｌ ｄｉａｃｒｙｌａｔｅ）ｗｉｔｈ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ［Ｊ］．Ｐｏｌｙｍｅｒ，２００７，４８（６）：１５６７． 致谢：本文撰文过程中参考天津医科大学胡帼颖，南京师范［１４］ 陈森军，张丽叶．辐照交联改性透明质酸的研究［Ｊ］．北京化工大 大学聂素云，山东大学贺艳丽，华南理工大学李森等论文文献，特 学学报（自然科学版），２００９，３：４６． 此致谢！ ［１５］ 阎雪莹，唐晓飞，王雪莹，等．熊果苷研究及应用进展［Ｊ］．中医药 参考文献： … 信息，２００７，２４（４）：１８． ［１］林婕，何聪芬，董银卯，等．化妆品功效成分的透皮吸收途径与 李士博，王兰霞，徐丽婷．复方熊果苷霜的制备与Ｊ临床应用［Ｊ］． 技术［Ｊ］．中国化妆品，２００９，２：９０． ，， 中国医院药学杂志，２００７，２７（２）：２５０． ［２］Ｌａｊａｖａｒｄｉ Ｌ，Ｃａｍｅｌ。Ｓ，Ａｇｎｅｌｙ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｗ ｆｏｒｍｕ１ａｔｉ。ｎ。ｆ ｖａｓ。ａｃｔｉｖｅ ｌ Ｊ 程冰，刘奕志，林振德．超声乳化动力学的应用进展［Ｊ］．中华 ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｕｓｉｎｇ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｅ ａｃｉｄ ｇｅｌ ｆｏｒ ｕｖｅｉｔｉｓ［Ｊ］． ｒ １。］ 眼科杂志，２００７，４３（６）：５６７． Ｊｏｕｒｎａｌ ０ｆ Ｃｏｎｔｍ１ｔｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２００９，１３９（１）：２２． 。 龙涛，田熙科，杨超，等．超声乳化溶剂扩散法制备阿奇霉素 ［３］ Ｎａｋａｏ Ｒ，Ｍａｔｕｏ Ｙ，Ｍｉｓｈｉｍａ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｓｅｐａｒａ— ｒ ］ 超细粉体［Ｊ］．武汉大学学报（理学版），２００４，５０（６）：６６５． ｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｃａ Ｃ：Ｓｕｐｅｒｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ， １ｎ 国家药典委员会．中国药典，Ⅱ部［Ｓ］．化学工业出版社，２００５：１． ２００９，４６９（１５—２０）：１８４０． Ｌ ｊ Ｌｉｕ Ｔ，Ｑｉｕ Ｊ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ／ｄｏｄｅｃｙｌａｍｉｎｅ／ ［４］Ｂｏｕｒｋｅ ＳＬ，Ｋｏｈｎ Ｊ．Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ—ｔｙｒｏｓｉｎｅ： ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ／Ｈ２０ ｖｅｓｉｃｌｅｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ＩＪ Ｉ．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅｓ ｐｏｌｙｃａｒｂｏｎａｔｅｓ，ｐｏｌｙａｒｙｌａｔｅｓ ａｎｄ ｅｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏ１） Ｆ ２１］ Ａ：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃ ａＪ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ａｓｐｅｃｔｓ，２００８，３２０（１—３）：８５． Ｌｉ Ｄ—Ｃ，Ｚｈｏｎｇ Ｘ—Ｋ，Ｚｅｎｇ Ｚ—Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔｅｄ ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｆｖ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００３，５５（４）：４４７． 一 ［５］Ｋｉｍ Ｄ—Ｈ，Ａｎ ＥＪ，Ｋｉｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｓｅｕｄｏ—ｃｅｒａｍｉｄｅ—ｂａｓｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ［Ｊ］．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒ— Ｒｅｌｅａｓｅ，２００９，１３８（２）：１０３． 降香总黄酮提取工艺的正交设计实验优选 郭丽冰，王蕾，严优芍 （广东药学院－中药学院，广东广州５１０００６） 摘要：目的优选提取降香中总黄酮的最佳工艺。方法采用正交实验设计，以总黄酮提取量为指标，对降香总黄酮提取 条件进行优选。结果最佳提取工艺为１Ｏ倍量７０％乙醇在９０％提取３次，１．５ｈ／＆，测得总黄酮平均提取量为９２．１３ｍｇ， 平均含量为４．６１％。结论该提取工艺务件简单、稳定、提取效率高。 关键词：降香总黄酮； 正交实验；提取方法 ＤＯＩ标识：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００８－０８０５．２０１０．０８．０５３ 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００８－０８０５（２０１０）０８—１９６５－０２ 中药降香是豆科植物降香檀Ｄａｌｂｅｒｇｉａ ｏｄｏｒｉｆｅｒａ Ｔ．Ｃｈｅｎ的树 收稿日期：２００９－１１－２２；修订日期：２０１０－０２－２８ 干和根的干燥心材。降香的功效为行气活血，止痛，止血，用于治 基金项目：广东省中医药管理局资助项目（Ｎｏ．１０６００３８） 疗脘腹疼痛，肝郁胁痛，胸痹刺痛，跌扑损伤，外伤出血…。降香 作者简介：郭丽冰（１９６５－），女（汉族），广东揭阳人，现任广东药学院中药 学院副教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事中药化学成分研究与 的主要成分为挥发油和黄酮类化合物，其中，降香檀药材中总黄 开发工作． 酮的含量为２．５１％～５．８２％ 。黄酮类化合物具有抗炎、镇痛、 ・１９６５・ 时珍国医国药２０１０年第２１卷第８期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２０１０ＶＯＬ．２１ ＮＯ．８ 用于计算各因子 抗氧化、中枢神经作用及心血管方面的作用 。本课题组对降 离差平方和中最小的项来近似作为误差的估计，香进行了系统研究，建立了一个适合降香总黄酮的含量测定方 列的Ｆ比值 ，本实验采用“提取时间（因素Ａ）”项作为误差来 法 。本文应用该含量测定方法，以降香总黄酮提取量为考察 源项，对表２的总黄酮含量进行方差分析。结果见表３。 指标，通过正交设计实验进行工艺优化，对提取总黄酮的条件和 表３方差分析 影响因素进行了探讨，为降香总黄酮的提取工艺提供了科学依 据。 １仪器与材料 １．１仪器ＵＶ一２４５０紫外可见分光光度仪（ＳＨＩＭＡＤＺＵ），电子 分析天平（ＢＰ２１１Ｄ），ＨＨ一４型恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华 Ａ Ｂ Ｃ ４０．５６９ １４０１ ２０３ ７８９ ８５２ ２ ２ ２ １．０００ ３４．５３９ １９．４６９ １９．ｏｏｏ Ｄ １６５ ０１８ ２ ４．Ｏ６８ 误差４０．５７ ２ 仪器厂），ＲＥ ５２—９８型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。 １．２试剂乙醇（分析纯，汕头市西陇化工厂），甲醇钠（新制）。 由表２直观分析可知Ｒ ＞Ｒ ＞Ｒ。＞Ｒ ，即影响总黄酮提取 １．３ 药材和对照品降香药材（广州市药材公司中药饮片厂，产 量的主次因素为提取次数＞提取温度＞乙醇浓度＞提取时间，其 地海南），柚皮素对照品（实验室自制，经ｕＶ、 Ｈ—ＮＭＲ鉴定结 中提取次数和提取温度有显著性影响。根据表２—３，确定最佳 构，ＨＰＬＣ检测计算，纯度大于９８％）。 提取工艺为Ａ： Ｃ，Ｄ ，即７０％乙醇在９ｏ℃下提取３次，１．５ １１／ ２方法 ２．１ 降香总黄酮含量测定方法及工作曲线的确定精密称取柚 ２．５最佳提取工艺的验证精密称取３份降香粉末各２ ｇ，按最 皮素对照品０．００１ ４３ ｇ，用７０％乙醇溶解并定容至５０ ｍｌ备用。 佳提取工艺条件平行操作，提取液定容至２５ ｍｌ，按“２．３”项下方 分别精密吸取对照品溶液０．００，１．００，２．００，３．００，４．００，５．０ｏ， 法测定吸光度并计算总黄酮提取量和提取率。结果见表４。 ６．００ ｍｌ于１０ ｍｌ容量瓶内，准确加入１ ｍｌ甲醇钠，用７０％乙醇定 表４最佳提取工艺验证 容至刻度，摇匀，放置４０ ｍｉｎ，在４１０ ｎｍ处测定其吸光度。计算 得回归方程为Ｙ＝３，２４２ ２Ｘ一０．０１９ ３，ｒ＝０．９９９ ８，线性范围是 ０．０１４ ３～０．０８５ ９ ｍｇ。 次。 ２．２正交实验设计根据影响总黄酮的提取因素，在预试验的基 础上，选取提取时间（Ａ），提取次数（Ｂ），提取温度（Ｃ），乙醇浓度 （Ｄ）作为考察因素，每个因素设定３个水平，以总黄酮提取量为 考察指标，采用ｋ（３ ）表安排正交实验。结果见表１。 表１ 正交实验因素和水平 实验结果表明用最佳提取工艺条件提取，总黄酮的提取量高 于其他各正交实验值，故本最佳工艺条件合理。 ３结果 本实验得出的最佳提取工艺为１０倍量７０％乙醇在９ｏ℃提 取３次，１．５ ｈ／次，测得总黄酮平均提取量为９２．１３ ｍｇ，平均含量 为４．６１％。该提取工艺具有稳定性好、黄酮得率高、操作简单且 成本较低的特点。 ２．３样品溶液的提取及含量测定将干燥的降香药材粉碎，精密 ４讨论 实验先用石油醚索氏提取除去部分脂溶性杂质，再用乙醇提 称量２ ｒ，／份，按照 （３ ）正交实验表的工艺条件加入１０倍量乙 醇进行回流提取。提取液合并蒸干后用７０％乙醇定容至２５ ｍｌ， 取总黄酮。发现是否使用石油醚脱脂对总黄酮含量测定结果影 故省去石油醚脱脂而直接使用乙醇提取。 取１ ｍｌ各提取液稀释至１０ ｍｌ，再取１ ｍｌ稀释液按对照品测定方 响不大，正交实验前考察了乙醇用量对于总黄酮提取量的影响，采用 法测量其吸光度并计算总黄酮提取量。结果见表２。 表１ （３ ）正交实验设计和结果 ５，８，１０，１５，２０倍量乙醇进行提取，实验结果表明乙醇用量超过 ｌ０倍以上则总黄酮提取量无显著性差别，故以１Ｏ倍量乙醇进行 提取。 参考文献： ［１］ 国家药典委员会．中国药典，Ｉ部［ｓ］．北京：化学工业出版社， ２００５：１５８． ［２］ 肖省娥，林励．不同来源的降香药材中总黄酮含量测定［Ｊ］．基层 中药杂志，２０００，１４（６）：１２． ［３］Ｚｈａｏ Ｑ，Ｇｕｏ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｙ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏ・ ｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｄｒｕｇ“ＪｉａｎｇＸｉａｎｇ”（Ｌｉｇｎｕｍ Ｄａｌｂｅｒｇｉａｅ Ｏｄｏｆｉｆｅｍｅ） ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０００，９（１）：１． ［４］郭丽冰，王蕾．降香总黄酮含量测定方法的研究［Ｊ］．中药材， ２００８，３１（５）：６８． ［５］于立芬．数理统计方法［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９８５： ２．４ 方差分析上述实验所用正交表无空白列作对照，所以将 】７３ ・１９６６・
