Strait Pharmaceutical Journal Vol 21 No.4 2009 amlingant melanoma(J].Clin Oncol 2004;22(3):2891.900. hukin.12 Gene-Modifide Tumor Va ̄me in a Melanoma Model in 【l4】Gregory B.L ̄mki,Brian B|【dgwell,Jason Zimmerer.et a1.ILl2 miceU ̄Clinical Cancer Research.2004;10(1):4165・4175. Pretreatments Enhance H'N-a-Induced Janus Kinase-SrAT Signal— (2O】Hess SD.E#lam ̄NK.Shiroko J。et a1.Antitamor efficacy of a hu— ing nad Potentiate the Antitumor Effects of IFN.口in a Murine Model man interhukin-12 expression plasmid demonstrated in a human pe— of Malignant Melanoma【J].The Journal of Immunology。2004.172 ripheral blood leukocyte/human lung uLvnor xenograft SCID mouse (2):7368.7376. modelO】.Cancer Gene Ther.2001,8(5):371・377. [153 Loree hdhr.Kathieen Merkler。Jefffey Westover,et a1.Evaluation of [21 ̄Jc Chiou,Lj Chang,Cf Chen。et a1.Effcets of gamma-irradiated GM— Toxicity flulowin8 Electircally Mediated lnterleukin・12 Gene Deliv- CSF andIL-12 producing autologusmelanoma cellsandtumorlysate ery in a B16 Mouse Melsnolrta ModalU】.Clinical Csncer Research。 onex vivo c ̄okme production byperipheralT cells【J】.CancerRe・ 20o6;12(3):3177—3183. search,1998。58(15):1225.1230. (16】Daud AI.De con:i RC,Andrews S,et a1.Phase I trial of interleukin- [22】Minkis K。Kavanaqh IX;.Alter G。et a1.Type 2 Bias of T cells ex— 12 plasmid dectroporatino in patients with metastatic melanoma(J】 panded from the bkxxi of melanoma patinets switched to type 1 by .J ain Oncol。2008,26(36):5896-9O3. IL.12p70 mRNA-transfected dendritic cells[J3.Cancer Res.2008; [17】Rakhmilevieh AL。Janssen K.Hao Z。et 1a.Inteleukin.12 gene thera. 68(22):9441.50. PYof a weakly imraunogenic Inou. ̄e mammary carci.T-om results in (23】赵军,黄丽娜,成洪波.等.IL-12基因修饰瘤苗治疗小鼠眼内移 reduction of spontaneous lung metastases via a T-celLindependent 植性黑色素瘤疗效观察【J】.眼科研究,2007.25(3):190.192. mechanismU}.Cancei Gene Ther,2Ooo.7:826-838. [24】杨英,付士波,刘树铮.IL.12联合B7。1基因放射治疗对小鼠B16 (18】Patrizia Nanni,Ilaria Rossi,Carta De Giovanni。et a1.1nterhukin-12 移植肿瘤生长的影响【J】.吉林大学学报(医学版).2006,32(6): 8ene Therapy of MHC-negative Murine Melanoma Metastases[J】 947.949. .Cancer Research。1998;58(3):I225—1230. [25】张建华,赵德矿,王青青。等.重组腺病毒载体rolL.12治疗小鼠 [193Tomesz Switaj。AhmedJa ̄li,AnnaB,et a1.唧G Immunostimulatory 黑色素瘤的实验研究(J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(6): Oligodeoxynudeotide 1826 Enhances Antitumor Effect of Inter- 546—547. ・药剂・ 正交试验法优选金钱草中总黄酮的超声提取工艺 乔明福‘,华世标 ,何洋 【1.珠海联邦制药股份有限公司珠海519040;2.广东药学院广州510006) 摘要:目的优选金钱革中总黄嗣的提取工艺。方法 以芦丁为对照品计算总黄嗣含量, ̄t/t¥-gl素试验和正交试验考察不同因素和水平对 提取工艺的影响。结果 最佳提取工艺为提取溶剂为70%乙醇溶液,料液比为1:35,超声仪工作频率为45kHz.提取时间为60rain。结论 谈工艺简单易行,是提取金钱单总黄酮物质的有效途径。 关键词:金钱革;总黄酮;提取工艺;正交试验 中圉分类号:R943文献标识码:A文章绾号:1006.3765(2009}-04.0o27.03 Optimization of ultrasonic extraction technique of the total flavonoids frOm Herba Lysimachiae by orthogonal experiment OlAO Ming-fu,HUA Shi—biao,HE Yang(1.ZHU Hal United Laboratories Co.Ltd.Zhuhai 519040,China; 2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China) ABSTRACT:OBJECTIVE To optimize the ultrasonic extraction technique of the total flavonoids from Herba Lysimachiae by orthogonal experiment.METHODS The content of the total flavonoids was computed with rutin as standard substance,and the influence of different factors and levels on the ultrasonic extraction technology were 作者简介:乔明福。执业药师。研究方向:抗生索类药物的合成.Entail:baqiao88 ̄163.∞m. *通讯作者:助理实验师,研究方向;中药质量标准和药动学研究,电话:0760.23562326。Email:heyan8626 ̄163.coin. ・27・ 海峡药学2009年第21卷第4期 investigated by means of simple factor experiment and orthogonal experiment.RESULTS The best extraction condition was as follows:adding 35 times volume of 70%alcohol。ultrasonic extraction for 60 min with 45 kHz u1. trasonic working frequency.CONCLUSION The extraction method is appropriate,simple and feasible,It is an ideal way to extract the flavonoids of Herba Lysimachiae. KEY WORDS:Herba Lysimachiae;Total flavonoids;Extraction technique;Orthogonal experiment 金钱草为报春花科植物过路黄Lysimachia ehristinae Hance的干燥全草,具有清利湿热,通淋,消肿。用于热淋。沙 果,平均回收率为99.9%,RSD为1.0%。 2.8单因素试验 在所用溶剂一定的条件下,材料的粉碎 淋,尿涩作痛,黄疸尿赤,痈肿疗疮,毒蛇咬伤;肝胆结石,尿路 结石【1】。金钱草含有黄酮类、酚性、苷类、鞣质、挥发油、氨基 酸、胆碱、甾醇、氯化钾、内脂类等成分。其中黄酮类研究的比 较深入[2),为提高金钱草提取工艺的科学性,特以主要成分总 黄酮为考察指标。采用正交试验法优选其超声提取工艺条件 的最佳条件。 1材料 1.1仪器UVll02型紫外一可见分光光度计(上海天美科学 仪器有限公司);AUY220型电子天平(日本岛津);KQ型超 声仪(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。 1.2试药金钱草药材(购自广州某药材公司),经鉴定为真 品;芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0080— 9705);水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量,精密称定。用 8o%乙醇溶液配制成浓度为0.4180mg・mLI1的对照品储备液。 2.2供试品溶液的制备 取金钱草药材粉末2 精密称定, 置具塞锥形瓶中,按不同条件加入提取溶剂,提取,提取液过 滤,精密量取25mL,置50mL量瓶中,加5%亚钠溶液 1mL,6min后,加1O%铝溶液lmL,6min后,加1tool・L 氢氧化钠溶液10mL,加水定容至刻度,摇匀,放置15rain。 2.3标准曲线的绘制 精密量取对照品储备液1.0、2.0、 4.0、6.0、8.0、10.0mL,置于50mL量瓶中,加 %亚钠溶 液1mL,6min后,加l0%铝溶液lmL。6rain后,加1tool・ LI1氢氧化钠溶液10mL,加水定容至刻度,摇匀,放置15min。 过滤。于500nm波长处测定吸收度。以芦丁对照品溶液浓度 (X)对吸光度(Y)进行线性回归,得回归方程为Y=1.130X lO-2X.1.600X 10 (r=0.9999)。结果表明,芦丁在8.360 ~83.60ug・mLI1浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。 2.4精密度试验 取同一浓度芦丁对照品溶液(50.16gg・ mL一1),按“2.3”项下方法操作,测定吸光度,连续测定5次。 吸光度值的RSD为0.1%,结果表明,仪器精密度良好。 2.5重现性试验取供试品6份。按“2.2”项下方法操作。计 算,总黄酮含量的RSD为2.0%,结果表明,方法重现性良好。 2.6稳定性试验取同一供试品溶液,按“2.2”项下方法操 作。分别在0、2、4、8、12h测定吸光度。吸光度值的RSD为 1.9%,结果表明,表明供试品溶液在12h内稳定性良好。 2.7加样回收率试验取同一供试品溶液,分别准确加入芦 丁对照品储备液2.O、4.0、6.OmL,按“2.2”项下方法操作。结 ・28・ 度、溶剂的浓度、提取时间、提取温度、超声仪的工作频率及料 液比都会对提取率产生影响。本试验选用乙醇溶液为提取溶 剂。确定影响乙醇提取效率的主要因素为:乙醇溶液的浓度、 提取时间、超声仪的工作频率和料液比。 2.8.1乙醇溶液的浓度对提取效果的影响:乙醇浓度对总黄 酮的提取率有较大影响,乙醇浓度太小和太大均会影响总黄 酮的提取。80%乙醇溶液提取率最高。 2.8.2提取时间对提取效果的影响:总黄酮的提取率随提取 时间的增加而增加,但提取时间增加到lh以后,提取率变化 1 2 3不大。 2.8.3料液比对提取效果的影响:溶剂用量对总黄酮的提取 率有一定影响,乙醇溶液的用量太小和太大均会影响总黄酮 1 l 的提取,当料液比为1:30时,提取率最高。 2.8.4超声仪工作频率对提取效果的影响:超声仪工作频率 1对总黄酮的提取率有一定影响,在实验室条件下,选择了28、 4O和45kHz 3个工作频率,当超声仪的工作频率为45kHz 时,提取率最高。 l 2 3表1因素水平 l 2 3O.1929 0.3925 0.4148 0.3271 0.2998 0.3337 0.2847 0.1934 0.2142 2.9正交试验根据单因素试验的结果,选择影响总黄 酮提取效果各因素中有意义的水平做正交试验,对结果进行 极差分析,以确定最佳提取条件。以乙醇溶液浓度(A)、提取 时间(B)、料液比(C)和超声仪工作频率(D)为4个因素,每个 2 3Strait Pharmaceutical Journal Vol 21 No.4 2009 因素选用3个水平,用 (3‘)正交表进行试验。因素水平见 表1,正交试验结果(见表1、2)。 3.1试验过程中,曾尝试过显色剂的不同用量和不同显色时 由表2直观分析R值看,最佳超声提取工艺是 AlB3C3D3,即用35倍量70%乙醇溶液在超声仪工作频率为 45kHz。提取60min。影响金钱草总黄酮提取率的主次因素为 A>D>C>B。 ‘ 间。结果文章中的显色剂用量和显色时间为最佳。 3.2正交试验确定的最佳提取工艺中料液比为1:35,溶剂用 量对总黄酮提取有一定影响。增加溶剂用量,有利于总黄酮的 渗出,但溶剂用量过大,增加了溶剂消耗。同时也增加了浓缩 回收溶剂的耗能。所以在实际生产中,应综合考虑各因素。 参考文献 [1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典CM].北京:化学工业 2.10最佳提取工艺条件的验证取金钱草药材粉末2g,精 密称定。按最佳工艺条件平行操作。按照“2.2”项下的方法测 定吸光度。根据回归方程得出总黄酮的平均含量为 出版社,2005。172. 0.4085%。RSD为1.0%。 [2)刘隽,邹国林.金钱草的研究进展【J).唐山师范学院学报,2002, 3讨论 3(24):8.10. 药典紫草膏处方优化方案探索 鲍福淼(浙江余姚市中医医院余姚315400) 摘要:目的探索药典紫草膏处方优化方案。方法 从制剂工艺难易、安全性、稳定性3个方面,对含与不合乳香、没药的二类不同组分紫草 膏进行药学实验比对。结果含乳香、没药的紫草膏制剂工艺复杂、安全性及稳定性较差。结论 以含鞣质类的中药替代乳香、没药,则更符 合临床要求。紫革膏处方优化方案可按此进行。 关键词:药典版紫草膏;自拟紫草膏;实验比对 中图分类号:TQ460.4文献标识码:A文章编号:1006—3765(2009 J.04.0029.02 Research of optimizing scheme for the prescription of codex comfrey oint- ment BAO Fu-miao(TCM Hospital of Yuyao city,Yuyao 315400,China) ABSTRACT.OBJECTIVE To study the optimizing scheme for the prescription of codex comfrey oint— merit.METHODS Comparing and contrasting by pharmacy experiments on the two different groups of comfrey ointments classified by the containing of mastic and myrrh or neither,through three aspects including the difficul— ty degree of producing process,safety and stability.RESULTS Comfrey ointment with mastic and myrrh was considered as worse in the prospect of producing difficulty,safety and stability.CONCLUSION The replacing of Chinese traditional medicine with tannins instead of mastic and myrrh,makes better accordance with clinical re— quirements,and the optimizing scheme is regarded to be carried out in this direction. KEY W0RDS:Codex comfrey ointment;Hand—made eomfrey ointment;Experimental comparing and contrasting <中国药典>收载的紫草膏,组方为紫草、当归、防风、地 腐生肌、解毒止痛”之功效【2]。组方原则及剂型选择与中医治 黄、白芷、乳香、没药,由清・顾世澄<疡医大全)的紫草膏加减 疗外科疾患的“去痴脱腐、托毒杀菌、敛口生肌”的手段相应; 而成。方中以紫草清热凉血解毒,疗血热毒盛为主药。辅以自 也与清・吴尚先在膏药专书<理瀹骈文)的观点:“一切肿疡、 芷散结消肿、排脓,防风祛风止痛。乳香、没药活血散结、化腐 溃疡、痈疮,皆可用消散之膏”及“凡病所结聚之处。拔之则病 生肌,佐以当归、地黄补血滋阴,助生肌收口(1j,诸药共凑“化 自出,无深入内陷之患”相合,可谓是一个十分成熟的中药制 剂,故笔者认为该中药制剂理应在临床上有广泛使用。但事实 却是处于弃用状态。而期刊上不时有自拟紫草膏报道,如<内 作者简介:鲍福淼,男(1965 )。副主任中药师。长期从事中药质控及 临床应用研究。联系电话:0574.63155840 蒙古中医药>刊登的内蒙古医学院附院的紫草膏,组方为紫 草、大黄、白芷、米壳;(医学理论与实践)介绍的河北石家庄军 ・29 ・