鲢内源性转谷氨酰胺酶的纯化及其性质

JournalofHuazhonriculturalUniversitgAgy

华　中　农　业　大　学　学　报

Vol．３７　No．６

Nov．２０１８,１０５~１１２

鲢内源性转谷氨酰胺酶的纯化及其性质

,,,,２

李金玲１,　叶蕾蕾１　尤　娟１２　熊善柏１２　胡　杨１２　安玥琦１２

,国家大宗淡水鱼加工技术研发分中心(武汉)武汉４２．３００７０

摘要　以鲢(肌肉为原料,采用硫酸铵盐析、凝胶过滤层析(Hohthalmichthsmolitrix)SehacrlSＧ３００pyyppy)和阴离子交换层析(对鲢内源性转谷氨酰胺酶(分离纯化,并对其酶学性质进HR)DEAEＧSeharoseFF)TGasep

２＋２＋

该酶适宜的反应p依赖性,最适C浓度为３４．２倍,H和温度分别为８．０和５０℃.鲢内源性TGase具有Caa２＋２＋２＋３＋、、、等金属离子则表现出抑制作用.鲢内源性TZnBaSnFeGase对鲢和草鱼肌球蛋白有较强的催化交

华中农业大学食品科学技术学院,武汉４１．３００７０;

,/,行研究.结果表明,酶液经多步纯化后可得单一酶蛋白,其分子质量为１比活力为１纯度提高００ku２６．７Umg

２＋２＋

//、范围能增加酶的活性,而高浓度的D３mmolL.DTT在低浓度(０~５mmolL)TT、EDTA及MCug、

联作用,能够诱导鲢、草鱼肌球蛋白交联形成多聚体,且对鲢肌球蛋白的催化交联作用更强.

关键词　鲢;内源性转谷氨酰胺酶;分离纯化;酶学性质;交联

()中图分类号　Q８１４　　文献标识码　A　　文章编号　１０００Ｇ２４２１２０１８０６Ｇ０１０５Ｇ０８

,)是一　　转谷氨酰胺酶(translutaminaseTGaseg种催化蛋白质分子中的赖氨酸ε氨基与谷氨酸γ羟ＧＧ

酰胺基发生酰基转移反应的酶.在鱼糜凝胶化的过程中鱼肉组织中的内源性TGase能催化肌原纤维蛋白分子间发生非二硫共价交联,形成三维网状的,已从动物、植物、微生物中分离纯化出T且不Gase同来源的T理化性质、催化机制与催Gase在结构、

４Ｇ６]

.化能力上表现出较大差异[

[]Ｇ１４

,纯化出T而关于Gase并对其性质进行了研究９

鲢内源性TGase的研究鲜见报道.笔者所在实验室前期研究表明,鲢内源性TGase活性是７种大宗淡水鱼肌肉中活性最高的.本研究以中国产量大、精深加工少的鲢为研究对象,研究鲢内源性TGase鲢、草鱼肌球蛋白催化交联特性的差异,旨在为淡水鱼糜的品质改良及内源性TGase在鱼糜加工中的应用提供理论参考.

１Ｇ３]

.的分离纯化方法、凝胶结构,提高鱼糜凝胶的硬度、弹性和持水性[酶学性质以及鲢内源性TGase对

的影响较大,其pH稳定性和热稳定性较差.1.1　试验材料

２＋２＋

依赖性且不同来源TTGase具有CaGase的Ca新鲜鲢、草鱼购于华中农业大学农贸市场,将其

激活效应有差异.EDTA、EGTA、NH４Cl是TGase放入水箱中保活运至实验室后宰杀,随后去头、皮及

２＋常见的抑制剂,它们通过对C的螯合或增加体系a＋中NH４的浓度阻断转氨基反应的进行来抑制

TGase的催化作用除受自身性质的影响外还受多种外部因素的影响.温度和pH对TGase活性

1　材料与方法

内脏,取鱼肉备用.N,二甲基酪蛋白、单丹磺酰NＧ尸胺,分析纯,三羧甲基氨基甲烷,分析Sima公司;g纯,硫酸铵、氯化钙、Amresco公司;DTT、EDTA、

[][]TGase的活性７.孙静静等８发现草鱼内源性

国药集团化学试剂有限DS等试剂均为分析纯,TGase粗酶液在不同条件下活性差异较大,TGaseS激活剂和抑制剂通过对TGase的激活或抑制作用公司.进而对鱼糜凝胶强度产生影响.

研究人员从多种海洋生物包括淡水鱼类中分离

收稿日期:２０１７Ｇ０８Ｇ２８

1.2　主要仪器

日本岛津公１７５０型紫外可见光分光光度计,

);)基金项目:国家自然科学基金项目(国家现代农业产业技术体系专项(３１６７１８８４CARSＧ４５Ｇ２７

:李金玲,硕士研究生．研究方向:水产品加工及贮藏．EＧmail３７３７９４３２９＠q．comq

:通信作者:熊善柏,教授．研究方向:水产品加工及贮藏工程．EＧmailxionsb＠mail．hzau．edu．cng

　　１０６

华中农业大学学报

第３７卷　

/司;美国伯乐公司;配制pBioＧRad电泳仪,FＧ４６００型荧光０．１molL的TrisＧHCl缓冲液;H８．０~９．０

//光度计,日本日立公司;美国GXK１６２０空柱,E公的缓冲液用０．５molL的TrisＧborate缓冲液.

２＋

/司;蛋白质凝胶成像色谱,美国伯乐公司;纳米粒度C的浓度调节为３mm测定DaolL时,TT、EDＧ

２＋２＋２＋２＋２＋３＋

),、、、、及Z英国马尔文仪器有T等金属eta电位分析仪(ZEN３６００A及MCuZnBaSnFeg、

限公司.

)1.3　试验方法浊度、粒径的测定.添加不同比酶活(７０、２、４、

)/)/蛋白质含量的测定.采用L以牛血６、１owr８UmTGase于肌球蛋白溶液(０．５mmL)y法,gg

]１５

.清白蛋白为标准蛋白[中.以相应比酶活的TGase缓冲溶液作参比于３２０

[６]

)和n２TGase酶活的测定.参照Takai等１m下测吸光值.采用ZEN３６００马尔文激光粒度g

[]

离子对酶活的影响.

Worr３at４)a７的方法.)T肌球蛋白的提取o等１Gas.参照Liu等[１８]

的方法.中e的提取、分离与纯化.加ris、３倍体积缓冲溶液T(G６a０se粗酶液提取:鱼肉mmol/L酶液.

o４l/０LDmmTTol、/pLH７Na．５C)l后均质、５mm,离心得ol/LTEGDasTeA粗、(硫酸铵盐析:取８份至不同饱和度,

１００mL粗酶液,加冲溶液复溶后测定各饱和度下蛋白质含量和酶活NH４)２SO４将所得蛋白质沉淀用缓.液用S０ep．４h５aμcrmy

l滤SＧ３膜００将复溶后的酶过H滤R凝胶过滤:取.平衡色谱柱后进样２次,４mL浓缩酶液进

行凝胶过滤层析,用缓冲液(ol/２LE０mmDToAl/、２LmmTrisoＧl/HLClD、０T．T１５、p

mHol７/TrisＧHCl．L５)N洗aC脱l、流速,活性.１．３mL/min,每管收集３mL,测定TGase超滤管对DEAE经ＧSeharo用１缩,取浓缩酶液上SepphacrseFlSF离子交换层析:谱柱后进样,用AEＧＧ３S０e０p

hHarR纯化后的酶０k液浓uDEyoseFF柱.平衡色risLＧ/HmCiln、p

H７０~０．５)进．６行mo线l/L性N梯aC度l(２洗０脱mm,流ol/速L.每管收集２m定.L将,测定收集T的Gas酶e活性.DSＧ５P)ATGGEas电e纯度鉴活组分用泳进行纯度鉴定及分子质量测定.电泳条件:蛋白质溶液质量浓度白质约１mg

/mL,上样蛋数１,分离胶质量分数５％,浓色１,２甲醇％,０(１电μg０压％８)０、醋酸V,０(１．１０２％５％)

考马斯亮缩蓝胶洗脱液.RＧ质２５量０分染

５、３６７)、４T测定最适５G、a５s０e、基本酶学性质.将反应溶液分别置于

５５、反６５应、７液,配制p０H℃下测定最适反应温度时酶活.时,配置不同的pH缓冲risＧacetapteH缓冲液４．０~６;配制．５的缓冲液用pH７．０~７．５０．１的缓冲液用mol/L的

仪测定其粒径分布,水溶剂粘度介质折射率７３°

１．３３,物质折射率是０．８１８．４７３５(

散mP射a􀅰角S度,

U８).)紫外光谱扫描.添加不同比酶活(０、２、４、６、８

采用/mg)TGase于肌球蛋白溶液(/中.５０nU９mVＧ１７５０型紫外可见光分光光度计在０．２mgmL２３)０~)范围内进行扫描.

游离氨基测定[９]

.取液,２g肌球.蛋参考白溶H于a１b８eeb１

的方法并略做修改mL硼酸缓离心７５℃水浴５min,取１０５m．１２５min后L６上清液０℃水浴,加２h１m,４L００磷酸缓冲０r/冲溶min液、光)１m,加L０４０nm２波长下比色m．１L０％T．１NBmSo.

l,/于L５H０℃水浴Cl终止６反０应mi,n

冷(却铝箔避后于1.4　数据处理试验重复３次,每次试验做对试验数据进行相关性分析和方差分析g

．０软件和Excel作图.采用３个平行.运用Oriin８SAS８．０软件.22.1　结果与分析

　TGase纯化及鉴定酸铵质量分数的增加１)硫酸铵最佳质量分数,ase.和蛋白质收率都增加从图１可知,随着硫.

硫酸铵质量分数为较低,当硫酸铵质量３０分％TG时,数增T加Ga至se和蛋白质收率都

(增加幅度(１０．２％).当硫酸３６．２铵％质)远量远分高数于４继蛋０％时,续增白质增TG加as幅e收

率度,这表明加,TGa主要是在硫酸铵质量分数为４０％时沉淀TsGe收

率变化不大,而蛋白质收率显著增加下来.as在

e硫酸铵质量分数为U４０％时,TGase比酶活为１５．５白中/mg

时,T,G显as著e高活性于,硫这说明在硫酸铵质量分数为酸铵在其他质量分数下盐４析０蛋蛋白中TGase纯度最高.

％

２)TGase分离纯化结果.图２A显示酶液经

T２mm３１３５mm１mTS２T　第６期

李金玲等:鲢内源性转谷氨酰胺酶的纯化及其性质

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SehacrlSＧ３００HR凝胶过滤后出现３个洗脱峰,py

第１个峰和第３个峰有明显的内源性TGase活性,经S第１个峰中杂蛋白较DSＧPAGE电泳分析发现,多,大分子蛋白含量较高,这可能是TGase的多聚体或硫酸铵沉淀过程中TGase与其他蛋白质聚集第３个峰中分子质量１文００ku处蛋白质大量浓缩,,献报道内源性T为Gase分子质量约为６０~１００ku

图１　硫酸铵盐析

２０Ｇ２１]

,形成的大分子蛋白[其结果有待进一步的研究.

Fi．１　Ammoniumsulhatepreciitategpp

小分子蛋白,故单体内源性TGase存在于第３个

]４,９,１２,１７,２２

.在该纯化步骤中T峰[Gase酶液较粗酶液/.纯度提高１比酶活增加为７９．２倍,１．１Umg

Fi．２　Gelfitrationchromatorahndexchanechromatorahggpyaggpy

图２　凝胶过滤及阴离子交换层析

在最适酶活温度５保DEAEＧSeharoseFF层析分离结果如图２B所示,示,０℃时,TGase稳定性较差,p

/经０~０．内源性６molLNaCl线性梯度洗脱后出现了３个温１０min即完全失活,２５、３７℃下保温２h,

洗脱峰,第３个峰有明显的内源性T而在４℃时酶活没有Gase活性.经TGase分别失活６０％、１６％,)３TGase纯度鉴定.对各步所得酶液进行

,图３)硫酸铵盐析后样品中含SDSＧPAGE电泳(

有大量杂蛋白.SehacrlSＧ３００HR凝胶过滤后py杂蛋白明显减少.DEAEＧSeharoseFF层析后在p/,此纯化步骤后比酶活提高至１较粗酶液２６．７Umg纯度提高３４．２倍.

显著变化,故在纯化及贮藏过程中要保持低温环境以保证内源性TGase活性.

即T１００ku处出现纯度较高的单一条带,Gase条带.

2.2　TGase基本酶学性质

)不同温度及p１H条件下TGase活性及稳定性.由图４A可知,TGase活性随着反应温度的升高显著升高,随着温度TGase在５０℃时活性最高,

[６,２２Ｇ２３]

,不同种类鱼的T５０℃１Gase最适反应温度不

同,但其差异较小.TGase的热稳定性如图４B所

,:;:;:粗酶液C标准蛋白M　１３rudeenzme２arker４４０％硫酸铵yroseFF．

的继续升高,酶活急剧下降.鳙、草鱼TGase最适酶活温度约为４５℃,罗非鱼、牡蛎为３７~

::沉淀４０％(NHSO５SehacrlSＧ３００HR;６DEAEＧSehaＧpyp４)２４;

Fi．３　SDSＧPAGEofTGasefromsilverg

carurinurificationpdgp

图３　TGase纯化电泳结果

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第３７卷　

环境　　pH也是酶活最为敏感的影响因子之一,酸性过强或碱性过强均会使酶活降低.从图４C可

最适p单磺尸胺与酪蛋白在pH与测定方法有关,H以看出,内源性T该性质可能会影响H５．５~６．５时,Gase活性较低,７．５~８．０范围内结合能力最强,p

[７]

.T之后随pH值增加,TGase活性急剧升高,H为８．０内源性TGase最适pH的测定２Gase在pHp

时T继续升高p保温２h酶活无明显变化,偏离Gase活性最大,H值,TGase活性中性时稳定性较好,有所降低.水产品中内源性TGase适宜的pH一中性pH后稳定性变差.

１６,２４Ｇ２６]

.般为７．如鲤、鱿鱼、罗非鱼、金线鱼[５~９．０,

)外源添加物对T　　２Gase活性的影响.外源添

加物对T不Gase活性有显著影响.由图５A可知,

２＋２＋添加C时,说明TaTGase无活性,Gase具有Ca２＋这主要是由于C能够结合到T改变内源aGase上,

Fi．４　EffectsoftemeratureandpHonTGaseactivitnditsstabilitgpyay

２２,２８]

.烷基化,使其失活[

图４　不同温度及pH条件下TGase活性及稳定性

２＋

/依赖性,且当C浓度为３mmaolL时酶活最高.激活作用.在对罗非鱼内源性TGase性质的研究

DTT对TGase的作用如图５C所示.DTT浓

/度在０~５mm对内源性TolL时,Gase有微弱的

１６]

,中也发现类似的增强作用[这可能是DTT作为

性T使其暴露出半胱氨酸活性位点,一种强还原剂,能够保护酶活性中的巯基,防止其被Gase的构象,与酰基酶、酰基供体形成酰基酶中间体,促进交联反

２８]２＋

.完全激活T应的进行[浓度与Gase所需的Ca２＋

/浓度分别为５和１．但其纯酶液最Ca２５mmolL,

[７,２＋２９]/.当适C浓度分别为５a０和２０mmolL１

氧化形成二硫键,还原状态的巯基能够促进酶与谷这一试验结果表明活性位置的巯基对TGase活性具有重要的作用.

鱼种类有关.未经纯化的鲤和罗非鱼TGase最适

３０]

.氨酰胺残基的γ羧基酰胺基结合并释放出氨[Ｇ

２＋

/浓度超过２内源性TCa０mmolL时,Gase活性

２＋

/急剧降低,表现出较强的抑制作用,草鱼、鳙中也出１０mmoLMGase失活２２％,g能使鲢内源性T

２,８]２＋２＋２＋２＋３＋

,、、、、现了类似现象[但是在海水鱼(如鱿鱼)中并没而相同浓度的C则使内uZnBaSnFe

)不同金属离子对T３Gase活性的影响.由表１

可知,二价金属离子对TGase活性有较大的影响.源性T这可能是由于二价金属离子Gase完全失活,对巯基有较强的亲和作用,能够与TGase活性中心的巯基结合,从而抑制TGase的活性.

2.3　TGase催化特性

)粒径及游离氨基的１TGase对肌球蛋白浊度、影响.浊度一定程度上可以表征肌球蛋白尾部聚集

有发现类似的抑制作用.

制作用,随着EDTA浓度的增加,TGase活性急剧TGase完全失活.这主要是由于EDTA能够螯合

２＋

,反应体系中的C并使内源性TaGase的活性部位/降低,当E内源性DTA浓度增加至１５mmoL时,

由图５B可知,EDTA对TGase具有强烈的抑

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李金玲等:鲢内源性转谷氨酰胺酶的纯化及其性质

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Fi．５　EffectsofCaClEDTA,DTTonTGaseactivit２,gy

图５　CaClEDTA、DTT对TGase活性的影响２、

表se活性的影响

Tab１le　不同金属离子对TGa１　EffectsofmetalionsonTGaseactivity金属离子

添加量/(相对酶活/酶液MetaElnizoy

ns

RelativMg２＋

meConcen０

tmmratiool/n

L)

１eactiv％

ity

Cu２＋

１７０８０Zn

２＋

１００Ba２＋１０１００FSe

n

２＋

０３＋１０１０００的程度,一般浊度值增加表明蛋白质聚集体的不断

０

形成,但当蛋白质颗粒较大时可能会发生散射[３１]从图加量６的A可知,鲢、草鱼肌球蛋白浊度随着增加而增加,但两者之间无显TG著as区e添.(别

P＞０．０５),这表明TGase能够诱导鲢、

草鱼肌球蛋白的尾部发生聚集且其聚集程度随酶量的增加而增大.由图白粒径逐渐增大６B可知,随着,鲢肌球蛋白粒径由TGase添加量增加,肌球蛋至１８９３．３nm,草鱼肌球蛋白粒径由６６７９２４．．５２nnmm增大

增大到与浊度试验结果一致１５０４．３nm,

这表明肌球蛋白之间发生了交联[３２]

,这鲢、草鱼肌球蛋白交联差.异０~性４不U大/m(gPT

＞０Ga．s０e诱导TGa/５鲢肌球蛋白粒)

,当径显著大于草se添加量增加至鱼肌球６蛋~白８U的粒m径g时,

(P＜０．０５明鲢内源性TGase诱导鲢鱼肌球蛋白交联)作,这用说强于草鱼肌球蛋白.

TGase诱导的交联反应主要是催化蛋白侧链上

的谷氨酸的应,形成蛋白中自由氨基的含量会下降εＧ(γγＧＧ羧基酰胺基和赖氨酸的Glu)ＧLys异肽键,反应体系中多聚体εＧ氨基发生反,可以通过测定反应前后氨基含量的变化反映交联反应进行的程度,表

征蛋白质的交联度[３３]

ase后肌球蛋白凝胶中游离氨基的含量显著低于.从图６C可以看出,添加T未添加G和草鱼T肌G球ase的肌球蛋白凝胶,表明蛋白交联形成了εＧ(γＧGTluG)aＧsLe催化鲢ys异肽键,使反应体系中游离氨基含量减少.且游离氨基含量随TGase添加量的增加而降低,,进一步证明鱼糜凝胶化过TGase催化肌球蛋白交联度逐渐增加程内源性成,增强鱼T糜Ga凝se能够促进蛋白凝胶网络结构的形

胶的品质.且当明鲢肌球蛋白交联度高于草鱼肌球蛋白~８U/gTGaPse添加量为

m时,鲢游离氨基低于草鱼(＜０．０５.

),表２)TGase对肌球蛋白的紫外吸收光谱影响.

草鱼肌球蛋白的紫外吸收光所示Gas谱如图.e对鲢、

随着紫外吸收光谱吸收值明显增大TGase添加量增加,鲢、草鱼肌球蛋白７,而G会使干酪素钠紫外吸收强度降低Tang等[３４]却报道MT.肌球蛋

白是一种与干酪素钠溶解性不同的盐溶性蛋白.在

盐溶液中使肌球蛋白进一步伸展开来Ca２＋

会促进肌球蛋白中,暴露出更多的活性位

αＧ

螺旋结构解旋,点和非极性芳香残基,有利于联[３５

螺旋的解旋.而T,G使肌球蛋白更大程度的伸展ase的催化交联可能会进一步促进TGase的催化交

],从而使其αＧ紫外吸收强度增大.

３)TGase对肌球蛋白交联度的影响.图内源性TGase添加量增加,鲢８电泳结果显示随着、草鱼肌球蛋白重链含量逐渐减少,进样口处蛋白质含量逐渐增加,表明形成了一致.且当εＧ(γＧTGase诱导鲢和草鱼肌球蛋白交联这与现１条新的蛋白条带TGlGuas)ＧeL添ys异肽键,游离氨基结果加量增加时,,这可能是由于肌球蛋白轻链３７~５０ku处出发生了交联.

3　讨鲢内　论

源性TGase粗酶液经４０％硫酸铵沉淀、

eFph阴离子交acrylSＧ３换００层H析R凝胶过滤和后得鲢内源性DEAEＧSep

harose提高DSＧPAGE电泳法测得其分子质量为３４．２倍,比活力提高至T１Gase纯化１２０６０k．７u

U./酶,其纯度mg,６TSFS　　１１０

华中农业大学学报

第３７卷　

);不同小写字母表示鲢、草鱼肌球蛋白浊度在不　不同大写字母表示相同TGase比酶活下鲢和草鱼肌球蛋白浊度差异显著(P＜０．０５

()silvercarndgrasscarosinindifferentTGaseconcentrationP＜０．０５．papmy

()sinturbiditinthesameTGaseconcentrationP＜０．０５．Differentlowercaselettersindicatesinificantdifferencesinmosinturbiditfygyyo

).D同TGase比酶活下差异显著(P＜０．０５ifferentcaitallettersindicatesinificantdifferencesbetweensilvercarndgrasscaroＧpgpapmy

,Fi．６　EffectsofendoenousTGaseonturbiditarticlesizeandfreeaminoofmosinsolutionsggypy

图６　T粒径及游离氨基的影响Gase对肌球蛋白浊度、

Fi．７　EffectsofendoenousTGaseonUVabsortionsectraofmosinsolutionsggppy

图７　TGase对肌球蛋白紫外吸收光谱的影响

;鲢S草鱼GA:ilvercarB:rasscar．pp

/,volumeofTGaseadditionis０,２,４,６,８Umresectivel．gpy

;;M:;/.１鲢S草鱼G标准蛋白M表示T　A:ilvercarB:rasscararker１~５:Gase的添加量分别为０、２、４、６、８UmＧ５showstheppg

Fi．８　EffectsofendoenousTGaseoncrossＧlinkaefrommosingggy

图８　TGase对肌球蛋白交联度的影响

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　１１１

/５mmolLDTT对酶有微弱的激活作用;TGase对

２＋２＋

/具有依赖性,最佳C浓度为３mmCaaolL.一

２＋

般随着C浓度增加,进一aTGase会被完全激活,

２＋２＋３＋

、、对内源性TBaSnFeGase有强烈的抑制作

/用,１５mmolLEDTA能使其完全失活;１~

　　纯化后的鲢内源性TGase最适反应温度和pH

２＋２＋２＋

、、分别为５０℃和８．０;EDTA及MCuZng、

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scallotriatedadductormuscleandNaClＧinducedinactivationps

/进３mmolL的CaClGase的活性,２能够完全激活T

２＋

一步提高浓度时表现出强烈的抑制作用,孙静步增加浓度,酶活无显著变化.本研究发现,

[]WO１１RRATAOA,YONGSAWATDGULJ．CrossＧlinkinfacＧgo

tomosinbrudetilaia(Oreochromisniloticus)transluＧyycpg静等

[８]

、娄Ca浓度和鳙内源性忠鲢内源性T纬

[２２

]也发现高Ca

２＋

会抑制草鱼GTasGe活性.

的催化交联作用,能够诱导鲢ase对鲢和草鱼肌球蛋白有较强

、草鱼肌球蛋白交联形成多聚体,且对鲢肌球蛋白的催化交联作用更强.insi等[２８

]发现大眼鲷、

罗非鱼、鱿鱼和鲤肌肉内源性相同TG酶as活e都能提高比目鱼鱼糜凝胶的弹性模量,

且条件下,罗非鱼、鱿鱼和鲤内源性的交联能力强于大眼鲷.这表明TGase对不TG同as来e源的肌球蛋白均有交联作用,但其交联能力存在差异.内源性力是否强于其TG他as不e对同来源的肌球蛋白的交联能同来源的肌球蛋白以及内源性

Gase对肌球蛋白的交联机制和作用位点都尚不清楚,有待进一步研究.

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华中农业大学学报

第３７卷　

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Purificationandsomeenzmaticproertiesoftranslutaminasefromsilvercarypgp

１２１１２１２１２１２

LIJinlinELeilei　YOUJuan　XIONGShanbai　HUYanueig　Yg　ANYq

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,２．NationalR&DBranchCenterorConventionalFreshwaterFishProcessinWuhan)fg(

Wuhan４３００７０,China)Abstract　Translutaminase(TGasefromsilvercaraspurifiedwithammoniumsulfatepreciiＧgpwp

,tationelfiltrationonSehacrlSＧ３００hihresolutionandDEAEＧSeharosefastflowionＧexchanegpygpgthatthemolecularmassofthepurifiedenzmewas１００ku．Theenzmeexhibitedfinalurificationfoldyyp

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１．ColleeooodScienceandTechnoloHuazhonriculturalUniversitgfFgy,gAgy,

Wuhan４３００７０,China;

thatthepurifiedenzmehadmaximalactivitt３０℃andpH７．５．Theactivitftranslutaminasewasyyayog

２＋

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２＋２＋２＋２＋２＋３＋

,,,,acid(EDTA)．ThemetalionsMCuZnBaSnFestronlnhibitedtranslutaminaseg,gyig

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(责任编辑:陆文昌)