猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究现状

动物医学进展。２０１２，３３（１）：１１７—１２０　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究现状　沈武玲１一，乔自林　，令世鑫　，冯玉萍。，冯若飞　，李明生　，林学仕。，柏家林　，王家敏　，马忠仁¨　（１．甘肃省动物细胞工程技术研究中心，甘肃兰州　７３００３０；２．西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州　７３００３０；　３．甘肃省永靖县畜牧局，甘肃永靖７３１６ｏｏ）　摘要：猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）是一种对养猪业危害严重的传染病，猪繁殖与呼吸综合征病毒　（ＰＲＲＳｖ）为有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒，且具有高度的变异性，有美洲型和欧洲型两个血清型。猪肺泡　巨噬细胞（ＰＡＭ）、恒河猴胎肾细胞系ＭＡ一１０４及源于ＭＡ一１０４的传代细胞系（如Ｍａｒｃ一１４５、ＣＬ一２６２１、ＨＳ．　２Ｈ和ＣＲＬ—ｌ１７１）对ＰＲＲＳＶ敏感。预防该病的常规疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。通常以特定种毒在　适当细胞系中培养增殖，经灭活或致弱，加入佐剂制得相应疫苗。灭活疫苗交叉保护性差，但使用安全；弱毒　疫苗抗体产生快、持续时间长、保护力强，但源毒能在猪群中持续存在而有安全隐患。　关键词：猪繁殖与呼吸综合征；ＰＲＲＳＶ；灭活疫苗；弱毒疫苗　中图分类号：￥８５２．６５９．６　，　．　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００７—５０３８（２０１２）０１—０１１７－０４　猪繁殖与呼吸综合征（Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）又称猪蓝耳病，是２０　世纪８０年代末暴发的一种新型传染病。１９８７年美　国首次报道了该病的发生，当时称之为猪神秘病　（Ｍｙｓｔｅｒｙ　ｓｗｉｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＭＳＤ），主要症状是妊娠母　猪的死亡率也高达５　以上Ｉ５］。该病已在很多省市　猪群流行，已成为规模化养猪场繁殖障碍的主要病　因。世界动物卫生组织（ＯＩＥ）将其列为必须报告的　动物疫病，我国将高致病性猪繁殖与呼吸综合征列　为二类动物传染病。　猪繁殖与呼吸综合征的流行特点及其病原特性　决定了该病一旦在猪群中出现，将很快通过空气和　接触及人工授精等途径传播开来，特别是在规模化、　猪发热、厌食、早产、流产、死产、木乃伊胎、弱仔等。　随后，该病迅速蔓延至欧洲养猪国家，一场空前的流　产风暴造成了１００万头猪的死亡，使欧美国家的养　猪业蒙受了灾难性的经济损失。１９９１年荷兰学者　Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ　Ｇ等［１　在Ｌｅｌｙｓｔａｄ研究所用猪肺泡巨噬　细胞（ＰＡＭ）首次分离到病毒，并命名为Ｌｅｌｙｓｔａｄ　ｖｉｒ　ｒ：ｕｓ（ＬＶ），在第１０次国际病毒大会上将该病毒归属　于新设立的动脉炎病毒科、动脉炎病毒属。２Ｏ世纪　集约化、现代化的高密度养猪地区，该病传播尤为迅　猛，经济损失更为严重。疫苗的研究和使用是目前　预防本病的最主要手段。　１　病原　继Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ等分离到Ｌｅｌｙｓｔａｄ　ｖｉｒｕｓ（ＬＶ），　欧、美、日学者也相继从表现ＰＲＲＳ类似症状的病猪　９Ｏ年代中期该病蔓延至亚太地区，我国于１９９５年　底在华北地区规模化猪场首先暴发和流行，１９９６年　郭宝清等［２］采用间接免疫荧光法（ＩＦＡ）从繁殖障碍　中分离到ＶＲ一２３３２、ＩＡＦ－ｅｘｐ９１和ＩＡＦ—ｋｌｏｐ等毒　株，目前国际上将这些毒株通称为ＰＲＲｓＶ。　ＰＲＲＳＶ为有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒，病毒粒子　直径５０　ｎｍ￣６５　ｎｍ，核衣壳２５　ｎｍ￣３５　ｎｍ，表面有　猪群中证实本病在国内的存在，并用猪巨噬细胞和　Ｍａｒｃ一１４５细胞成功分离了猪繁殖与呼吸综合征病　毒（ＰＲＲＳＶ）。２００６年４月，以仔猪高死亡率为特征　的高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国南方部分　明显的长约５　ａｍ的纤突，核衣壳呈立体对称的二　十面体。ＰＲＳＳＶ有２个血清型，即美洲型和欧洲　型，代表株分别为ＶＲ一２３３２株和ＬＶ株，２个毒株间　氨基酸的同源性为７８　～８１　，我国流行的　省、市暴发，给我国养猪业造成了较大的损失［３］。　２００８年６月，曾报道该病在湖南部分地区暴发，呈　地方流行性＿４ｊ。２０１０年上半年在我国部分地区发　病”，甚至在有些地区商品猪的死亡率超过５０　，母　６］。最近，在东欧发现了　生了以商品猪和母猪死亡率上升为主的所谓”高热　ＰＲＲＳＶ均属于美洲型毒株［与欧洲株属于不同亚型的高致病性毒株，并将其命　收稿日期：２０１１　１０—０２　作者简介：沈武￣＇（１９８７－－），女，江苏高邮人，硕士研究生，从事细胞培养、兽用生物制品的开发研究。通讯作者　１１８　动物医学进展２０１２年第３３卷第１期（总第２２３期）　名为Ｌｅｎａ。该病毒的基因组长约ｌ５　ｋｂ，有９个开　放阅读框，分别为ＯＲＦｌａ、ＯＲＦｌｂ、ＯＲＦ２ａ、ＯＲＦ２ｂ、　ｍＬ，结果表明这两种灭活疫苗对断奶仔猪有良好的　免疫原性和安全性。王旭荣等［１。　将ＰＲＲＳＶ　Ｎｓｐ２　基因缺失株ＪｉａｎｇＸｉ－３的第、９代病毒按常规方法制　成油佐剂灭活疫苗，经肌肉注射免疫ＰＲＲＳＶ和猪　圆环病毒（ＰＣＶ一２）抗原与抗体均为阴性的６０日龄　０ＲＦ３、ＯＲＦ４、ＯＲＦ５、ＯＲＦ６和ＯＲＦ７［　］，病毒基因　组相邻的编码框有部分重叠，有帽子结构和ｐｏｌｙ　（Ａ）尾。ＯＲＦｌａ和ＯＲＦｌｂ位于基因组的３　端，长　约１２　ｋｂ，占整个基因的７５　。ＯＲＦ２～ＯＲＦ７在基　因组的５　端，ＯＲＦ２ａ、ＯＲＦ２ｂ、ＯＲＦ３和ＯＲＦ４分别　健康猪，结果表明，经二次免疫后效果明显。由于猪　繁殖与呼吸综合征与其他传染病有混合感染的可　能，所以也有二联疫苗的相关报道。金扩世等Ｌ１　采　编码病毒次要结构蛋白ＧＰ２ａ、ＧＰ２ｂ、ＧＰ３、ＧＰ４，　ＯＲＦ５，ＯＲＦ６和ＯＲＦ７分别编码病毒主要结构蛋　用猪圆环病毒（ＰＣＶ一２）和ＰＲＲＳＶ强毒株研制成了　白，即囊膜蛋白（ＧＰ５或Ｅ蛋白），基质蛋白（Ｍ）和　ＰＣＶ一２和ＰＲＲＳＶ二联灭活疫苗试验结果表明，用　核衣壳蛋白（Ｎ）。ＧＰ５有６个抗原决定簇，能诱导　机体产生特异性中和抗体∞　；Ｍ蛋白是非糖基化蛋　白，在所有ＰＲＲＳＶ株问具性高度保守性，被认为与　病毒宿主细胞受体相互作用有关。Ｎ蛋白在病毒粒　子中含量较高，约占病毒蛋白总量的２Ｏ　９，６～４０　，　免疫原性极强，可用于ＰＲＲＳＶ感染的早期检　测［９。。。。与所有的ＲＮＡ病毒一样，ＰＲＲＳＶ具有高　该二联疫苗免疫４周龄仔猪，免疫后７　ｄ即可检测　到抗ＰＣＶ－２和ＰＲＲＳＶ抗体，免疫后２１　ｄ抗体可达　较高水平，２８　ｄ　ＥＬＩＳＡ抗体和中和抗体均达到高　峰，这一结果与报道的ＰＲＲＳ油乳剂灭活疫苗抗体　检测结果相似。如今，我国ＰＲＲＳＶ疫苗生产厂家　是以ＮＶＤＣ—ＪＸＡ１毒株为种毒生产灭活疫苗。由于　ＰＲＲＳＶ灭活疫苗的交叉保护性差，针对这一特点，　度的变异性＿１　，易形成一个异种群，近年来，ＰＲＲＳＶ　有学者提出研制自家苗的说法，目前还没有实施方　面的报告。　已向高致病性趋势演化口引。２００６年夏季，高致病性　猪繁殖与呼吸综合征先是从江西省发病，而后蔓延　至周边各省份［】３＝。　３　弱毒疫苗　弱毒疫苗具有抗体产生快、持续时间长、保护力　强，改善临床症状的效果比灭活疫苗好等诸多优点。　目前，国内外商品化ＰＲＲＳ弱毒疫苗所使用的病毒　株主要来源于ＡＴＣＣ—ＶＲ２３３２、Ｉ－１３８７／８、１－１１４０、　２　灭活疫苗　一ＰＲＲＳ灭活疫苗是研制较早的疫苗，１９９７年　Ｂａｙｅｒ公司就推出了灭活疫苗ＰＲＲｏｍｉＳｅＴＭ。目　前，国内外已有多种针对美洲型ＰＲＲＳＶ株（ＣＨ－　１ａ、ＩＳＵ—Ｐ、ＪＸＡｌ、Ｖ　Ａ１）与欧洲型ＰＲＲＳＶ株　ＣＨ一１ａ、ＪＡ一１４２、５７１０等ＰＲＲＳＶ强毒株。最早的商　品化弱毒疫苗是由德国Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ公司　的ＮＯＢＬ实验室于１９９５年研制生产［２　。我国自主　（ＬＶ、ＶＤ－Ｅ１、ＶＤ－Ｅ２）的商品化灭活疫苗，这些疫苗　免疫动物都能很好地抵御来自疫苗同源强毒株的攻　击［】　，代表产品有Ｉｎｔｅｒｖｅｔ公司生产的ＰＲＲｏｍｉＳ４＠　灭活疫苗、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ公司生产的Ｉｎｇｅｌ—　ｖａｃ　ＰＲＲＳ　ＫＶ＠灭活疫苗和Ｍｅｒｉａｌ公司生产的　ＰＲＯＧＲＥＳＳＩＳ＠灭活疫苗。我国在ＰＲＲｓ疫苗的研　究起步比较晚。哈尔滨兽医研究所从２０００年起用　ＣＨ—ｌａ株采用转瓶细胞培养技术，在Ｍａｒｃ－１４５细胞　研制的ＰＲＲＳ活疫苗是以ＣＨ－ｌａ株为原始种毒，通　过体外细胞传代致弱得到的，于２００７年正式投放市　场。２００９年，南京农业大学与瑞普生物公司共同研　发的ＰＲＲＳ活疫苗（Ｒ９８株）也被批准为新兽药。有　文献报道，将高致病性ＰＲＲＳＶ　ＨｕＮ４毒株经Ｍａｒｃ－　１４５细胞传１１２代致弱后，可有效预防仔猪患高致　病性ＰＲＲＳＶＴＭ］。ＰＲＲＳＶ弱毒疫苗最大缺点就是　安全性差，Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ　Ｓ等ｌ２。］研究表明，用ＰＲＲＳ弱　毒苗接种母猪后，会对母猪的繁殖性能造成不利影　上大量增殖了较高滴度（ＴＣＩＤｓ。≥１０　・。）的ＰＲＲＳＶ，　经甲醛灭活后制成油佐剂灭活疫苗［１　，用该疫苗免　响，甚至可通过子宫感染胎猪。Ｎｉｅｌｓｅｎ　Ｊ等［２。　用从　疫接种３０头３月龄猪，先后免疫接种２次，间隔２Ｏ　胎儿、死胎及死亡仔猪中分离的疫苗源毒感染怀孕　ｄ，在首免第５天就可检到抗体，第２８天抗体达到高　晚期母猪，证明疫苗源毒能在猪群中持续存在，并引　峰，第５６天抗体仍维持较高的水平。赵坤等［１　］研　发疾病。由于存在安全隐患，在欧洲（如德国）禁止　制出了ＰＲＲＳ蜂胶佐剂组织灭活疫苗，临床效果显　用弱毒疫苗来预防ＰＲＲＳ　主要采取扑杀的方法净　著。王隆柏等ｍ　以ＰＲＲＳＶ　Ｆｕｚｈｏｕ　０１株为制苗种　毒，经Ｍａｒｃ一１４５细胞增殖、超速离心浓缩、甲醛灭活　后，分别制成新型佐剂ＩＭＳ１３１２灭活疫苗和油乳剂　化猪群　在国内，安全性也是评价ＰＲＲＳ弱毒疫苗　的重要指标之一。陈瑞爱等　使用高致病性ＰＲＲＳ　（ＪＸＡ１一Ｒ株）活疫苗对仔猪进行免疫，仔猪无不良　灭活疫苗，两种疫苗病毒含量约为１０　。ＴＣＩＤｓ。／　临床表现；使用该疫苗对配种前母猪、怀孕８０　ｄ～９Ｏ　沈武玲等：猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究现状　１ｌ９　ｄ母猪、临产前１５　ｄ母猪进行免疫，母猪精神、食欲、　体温均正常，并在预产期顺利产仔，而且ＪＸＡ１一Ｒ　株活疫苗表现出良好的安全性。现在我国很多猪场　体细胞密度４×１Ｏ　个／ｍｇ、微载体浓度７　ｍｇ／ｍＬ，　在高糖ＤＭＥＭ（含３０　ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖，６　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｇｌｎ）培养基中培养，４８　ｈ后每１２　ｈ换液５０％的培　在使用弱毒疫苗免疫猪群，实践证明不仅能有效地　养方式效果最为理想。穆光慧等　。　利用Ｃｙｔｏｄｅｘ－３　控制了ＰＲＲＳ的发生与传播，减少了经济损失，而且　微载体培养Ｍａｒｃ一１４５细胞并测定ＰＲＲＳＶ在微载　未见发生疫苗病毒毒力返强和基因重组。　体培养的细胞上的ＴＣＩＤＳ。，表明细胞接种密度为　４。２８×１０　ｃｅｌｌｓ／ｍＬ时，病毒滴度可达到ｌＯ　・　４培养ＰＲＲＳＶ用细胞的相关研究　要有合适的细胞系。然而，ＰＲＲＳＶ对细胞有严格的　趋向性，这种趋向性是由细胞表面特异性受体或其　它参与病毒侵入的蛋白质决定的，包括硫酸乙酰肝　Ｄｓｏ，证明利用微载体增殖ＰＲＲＳＶ是可行的。　无论是病毒分离、疫苗生产，还是病毒致弱都需　ＴＣＩ５结语　由于ＰＲＲＳＶ具有高度变异的特点，为疫苗研　究和疾病防范带来了挑战。在绝大多数省份存在疫　素、唾液酸黏附素（Ｓｎ）以及ＣＤ１６３。ＰＲＲＳＶ敏感　情、规模饲养和散养长期并存和牲畜流通频繁及生　的细胞系的研究较多，最初，研究人员只发现　物安全现状不容乐观的背景下，就我国ＰＲＲＳ流行　ＰＲＲＳＶ能在猪原代肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）中增殖复　现状而言，应用疫苗预防ＰＲＲＳ应该是最佳选择。　制，具较高产量，但成本高。没有敏感的细胞系也给　现有的灭活疫苗交叉保护性差，但使用安全，常用于　当时ＰＲＲＳＶ研究带来了一些障碍，后来一些研究　ＰＲＲＳ阴性群或种猪场。弱毒疫苗具有抗体产生　表明ＰＲＲＳＶ能在恒河猴胎肾细胞ＭＡ－１０４中复　快、持续时间长、保护力强Ｉ但源毒能在猪群中持续　制。１９９２年，Ｃｏｌｌｉｎｓ　Ｊ　Ｅ等口目利用由Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　存在，存在安全隐患。２０１０年，我国ＰＲＲＳ弱毒疫　Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｅａｌｔｈ公司建立的ＣＬ２６２１细胞　苗进入国家强制免疫计划，疫苗需求量显著增加，因　系分离得到ＡＴＣＣ　ＶＲ－２３３２毒株，由于该公司已申　此，实现生物反应器大规模悬浮培养生产是一种必　请专利，该细胞系的可用性较低。１９９３年，Ｋｉｍ　Ｈ　Ｓ　然趋势。由于持续感染、隐性带毒普遍，加上存在抗　等［２　利用限制稀释法从ＭＡ－１０４克隆得到Ｍａｒ　体依赖性增强作用，导致常规疫苗免疫保护效果较　１４５细胞，并证明该细胞能用于ＰＲＲＳＶ的增殖，目　差，研发确实、可靠、高效的新一代疫苗也是未来一　前Ｍａｒｃ一１４５细胞应用较广泛。有学者对Ｍａｒｃ一１４５　个方向。　细胞病变机制进行了研究，刘伍梅等口　］通过形态学　参考文献：　观察证明ＰＲＲＳＶ感染的Ｍａｒｃ一１４５细胞确实发生　［１］Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ　Ｇ．Ｌｅｌｙｓｔａｄ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ　ａｂｏｒｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｖｅｔ　Ｒｅｓ，１９９３，２４（２）：１１７—１２４．　了细胞凋亡现象。此外，用来培养ＰＲＲＳＶ的细胞　系还有从Ｍａｒｃ１４５中克隆出来的更为敏感ＨＳ．２Ｈ　［２］　郭宝清，陈章水，刘文兴，等．从疑似ＰＲＲＳ流产胎儿分离　ＰＲＲＳＶ的研究［Ｊ］．中国畜禽传染病，１９９６，１８（２）：１－４．　细胞系和ＣＲＬ１１７１细胞系。２０１１年，Ｓａｑｏｎｑ　Ｍ　等［２８］通过逆转录病毒载体将人类端粒酶逆转录酶　（ｈＴＥＲＴ）ｃＤＮＡ转染至猪肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）中　获得对ＰＲＲＳＶ敏感的猪肿瘤细胞系。除寻找对　［３］童光志，周艳君，郝晓芳，等．高致病性猪繁殖与呼吸综合征病　毒的分离鉴定及其分子流行病学分析［Ｊ］．中国预防兽医学　报，２００７，２９（５）：２３—３２６．　［４］彭　红．高致病性猪蓝耳病的流行病学调查报告ＦＪ］．湖南畜牧　兽医，２００９（６）：３７－３９．　ＰＲＲＳＶ更为敏感的细胞系以外，将现有敏感细胞实　现大规模培养也是各生物制品公司关注的焦点。工　业化大生产所用的动物细胞培养主要包括以下几种　技术，滚瓶细胞培养技术、悬浮细胞培养技术和中空　［５］唐８８．　利，彭明义，李江，等．２０１０年上半年我国部分地区猪场　疫情与ＰＲＲＳ疫苗接种状况调查ｌ－Ｊ］．猪业科学，２０１０（９）：８６—　［６］　吕永钢，吴　韬，王朝营，等．不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综　纤维细胞培养技术。虽然细胞培养方法有很多种，　但是生物制品大规模生产时，悬浮细胞培养技术（包　括微载体培养）是最佳培养方法。目前，我国病毒性　合征病毒增殖效果比较［Ｊ］．中国兽药杂志，２０１０，４４（３）：３４—　３６．　［７］刘光清．猪繁殖与呼吸综合征研究进展［Ｊ］．中国预防兽医学　报，２００１（１）：７２—７５．　疫苗的生产多采用大方瓶和转瓶技术培养细胞和病　毒，劳动强度高，占地面积大，生产不稳定，难于进行　质量控制。但已有不少关于细胞培养大规模生产　［８］Ｐｉｒｚａｄｅｈ　Ｂ，Ｇａｇｎｏｎ　Ｃ　Ａ，Ｄｅａ　Ｓ．Ｇｅｎｏｍｉｃ　ａｎｄ　ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　ｖａｔｉａ—　ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｍａｊｏｒ　ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ＧＰ５　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｃａｎ　Ｊ　Ｖｅｔ　Ｒｅｓ，１９９８，６２（３）：　１７０—１７７．　‘　ＰＲＲＳ疫苗的报道，主要集中于微载体培养，培养过　程中各个关键工程参数尤其重要。宫飞等［２如对微　载体培养Ｍａｒｃ－１４５细胞的条件进行了优化，以微载　［９］Ｃａｎｅｅ—Ｔｉｒａｄｏ　Ｓ　Ｍ，Ｅｖａｎｓ　Ｒ　Ｂ，Ｙｏｏｎ　Ｋ　Ｊ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ　ｅｐｉｔｏｐｅｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖｅｔ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏ—　１２Ｏ　动物医学进展２０１２年第３３卷第１期（总第２２３期）　ｐａｔｈｏｌ，２００４，１０２（３）：２４９—２６２．　ｐｉｇｌｅｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ＨＰ－ＰＲＲＳ［Ｊ］．Ｖｅｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，１３８（１）：　［１Ｏ］Ｄｏａｎ　Ｄ　Ｎ，Ｄｏｋｌａｎｄ　Ｄ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　３４—４Ｏ．　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．　［２２３　Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ　Ｓ，Ｓｔｒｙｈｎ　Ｈ，Ｓｏｇａａｒｄ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｉｎ—　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２００３，１１（１１）：１４４５—１４５１．　ｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ｐｉｇｓ　ｗｉｔｈ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　［１１３　Ｈｏｌｌａｎｄ　Ｊ，Ｓｐｉｎｄｌｅｒ　Ｋ，Ｈｏｒｏｄｙｓｋｉ　Ｆ，ｅｔ　ａＬ　Ｒａｐｉｄ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｃｉｒｃｏ　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｐｒｅｙ　ｏｆ　ｖｉｒａｌ　ｇｅｎｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８２，２１５：１５７７—１５８５．　Ｖｅｔ　Ｍｅｄ，２００２，５３（２）：８３—１０１．　［１２３中国农业科技导报，２０１０，１２（４）：１３８．　［２３］　Ｎｉｅｌｓｅｎ　Ｊ，ＢＯｔｈｅｒ　Ａ，Ｂｏｌｌｅ—Ｈａｎｓｅｎ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　［１３］Ｔｉａｎ　Ｋ，Ｙｕ　ｘ，Ｚｈａｏ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｅａｔａｌ　ＰＲＲＳＶ　ｖａｒ［一　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｔｅ　ｔｅｒｍ　ｐｒｅｇｎａｎｔ　ＳＯＷＳ　ｗｉｔｈ　ａ　ｆｉｅｌｄ　ｉｓｏｌａｔｅ　ｏｆ　ａｎｔｓ：ｕｎｐａｒａｌｌｅｌ　ｏｕｔｂｒｅａｋｓ　ｏｆ　ａｔｙｐｉｃａｌ　ＰＲＲＳ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ　ａｎｄ　ｍｏ—　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖａｃｃｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｎｉｑｕｅ　ｈａｌｌｍａｒｋ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］。Ｖｅｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，８４（１／２）：１－１３．　２００７，２：ｅ５２６．　［２４］　陈瑞爱。裴仉福，罗满林．高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫　［１４］吴佳俊，遇秀玲，蒋桃珍，等．猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗　苗的免疫效果观察［Ｊ］．中国动物保健，２００９（７）１８３—８６．　研究进展［Ｊ］．中国预防兽医学报，２０１０，３２（８）：６５５—６５８．　［２５］　Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｊ　Ｅ，Ｂｅｎｆｉｅｌｄ　Ｄ　Ａ，Ｃｈｒｉｓｉｔａｎｓｏｎ　Ｗ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　［１５］郭寰清，蔡雪晖，刘文兴，等．猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗　ｏｆ　ｓｗｉｎｅ　ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｓｐ［ｒａｔｐｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ（ｉｓｏｌａｔｅ　的研制［Ｊ］．中国预防兽医学报，２０００，２２（４）：２５９—２６２．　ＡＴＣＣ　ＶＲ一２３３２）ｉｎ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｐｒｏ—　［１６３赵坤，张慧辉，郭东升．猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的　ｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ　ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｅｔ　Ｄｉａｇｎ　Ｉｎ—　研制口］．安徽农业科学，２００５，３３（７）：１２３８，１２５７．　ｖｅｓｔ，１９９２，４（２）：１１７—１２６．　［１７］王隆柏，魏宏，陈少莺，等．猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫　［２６］　Ｋｉｍ　Ｈ　Ｓ，Ｋｗａｎｇ　Ｊ　Ｙｏ０ｎ　Ｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　苗安全性和免疫原性测定［Ｊ］．福建农业学报，２００７，２２（２）：　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｘｅｐｒｏｄｕｅｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＰＲＲＳ）ｖｉｒｕｓ　１８５—１８７．　ｉｎ　ａ　ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＡ－１０４　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　［１８］王旭荣，张彩勤，赵炳武，等．猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒　Ｖｉｒｏｔ，１９９３，１３３：４７７－４８３．　Ｎｓｐ２基因缺失株Ｊｉａｎｇｘｉ－３灭活疫苗免疫效果评价［Ｊ］．中国　［２７］　刘伍梅，汪铭书，程安春，等．ＰＲＲＳＶ感染Ｍａｒｃｅｌ４５细胞凋亡　兽医药杂志，２０１０（３）：１０—１３．　的形态学观察［Ｊ］：黑龙江畜牧兽医，２００８（３）：６Ｉ－６３．　［１９］金扩世，韩松，鲁会军，等．猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸　［２８］　Ｓａｑｏｎｑ　Ｍ，Ｐａｒｋ　Ｃ　Ｋ，Ｋｉｍ　Ｓ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ　ｒｅ—　综合征二联灭活疫苗免疫效力［Ｊ］．中国兽医学报，２０１０，３Ｏ　ｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｍｏｎｏｍｙｅｌｏｉｄ　ｃｅｌｌ　（５）：５７３—６０６．　ｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏ—　ｒ２Ｏ］　Ｇｏｒｃｙｃａ　Ｄ　Ｅ，Ｓｐｒｏｎｋ　Ｇ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｆｉｅｌｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｒｏｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ＭＬＶ　ＰＲＲＳ　ｖｉｒｕｓ　ｖａｃｃｉｎｅ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ＰＲＲＳ　ｎｅｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２１８８９９５６．　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｓｗｉｎｅ　ｈｅｒｄｓ［ｃ］．Ｐｒｏｃ．２６ｔｈ　Ａｎｎｕｌ　［２９］　宫飞，朱明龙，周燕，等．微载体培养Ｍａｒｃ一１４５细胞实验条　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉ　ＡＳＳＯＣ　ｏｆ　Ｓｗｉｎｅ　Ｐｒａｃｔｉ，Ｏｍａｈａ，ＵＳＡ，　件的优化［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００７，２０（５）：３７２—３７５．　１９９５：４０１—４１１．　．　［３０３　穆光惹，李嘉爱，齐冬梅．猪繁殖与呼吸综合征病毒在Ｍａｒｃ－　［２１］Ｔｉａｎ　Ｚｈｉ—Ｊｕｎ，ＡｎＴｏｎｇ—Ｑｉｎｇ，Ｚｈｏｕ　Ｙａｎ－Ｊｕｎ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ａｔｔｅｎｕ—　１４５细胞微载体上培养条件的研究［Ｊ］．广东畜牧兽医科技，　ａｔｅｄ　ｌｉｖｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｈｉｇｈｌｙ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃ—　２０１０，３５（４）：３７—４０．　ｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ（ＨＰ－ＰＲＲＳＶ）ｐｒｏｔｅｃｔｓ　Ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｏｒｃｉｎｅ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ＳＨＥＮ　Ｗｕ—ｌｉｎｇ　’　，ＱＩＡＯ　Ｚｉ—ｌｉｎ　，ＬＩＮＧ　Ｓｈｉ—ｘｉｎ　，ＦＥＮＧ　Ｙｕ—ｐｉｎｇｚ，ＦＥＮＧ　Ｒｕｏ－ｆｅｉ　，ＬＩ　Ｍｉｎｇ—ｓｈｅｎｇ　，　‘ＬＩＮ　Ｘｕｅ—ｓｈｉ３，ＢＡＩ　Ｊｉａ—ｌｉｎ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉａ～ｍｉｎｚ，ＭＡ　Ｚｈｏｎｇ—ｒｅｎ　（１．Ｇａｎｓｕ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ，Ｌａｎｚｈｏｕ’Ｇａｎｓｕ，７３００３０，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　ＵｎｉｖｅｒＳｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａ“　８ｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ，７３００３０，Ｃｈｉｎａ；　３．Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆ　ＹｏｎｇＪｉｎｇ　Ｃｏｕｎｔｙ，ＹｏｎｇＪｉｎｇ，Ｇａｎｓｕ，７３１６００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＰＲＲＳ）ｉｓ　ａ　ｎｅｗ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｓｅｒｉｏｕｓ　ｈａｒｍ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｗｉｎｅ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ．ＰＲＲＳＶ　ｉｓ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｅｎｖｅｌｏｐｅｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ—ｓｔｒａｎｄ　ＲＮＡ　ｖｉｒｕｓ．Ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ　ｈａｓ　ｈｉｇｈ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｓ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｗｏ　ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ—Ａｍｅｒｉｃａ　ｓｔｒａｉｎ　ａｎｄ　Ｅｕｒｏｐｅ　ｓｔｒａｉｎ．Ｐｏｒｃｉｎｅ　ａｌｖｅｏｌａｒ　ｍａｃ—　ｒｏｐｈａｇｅｓ（ＰＡＭ），Ｍａｃａｃａ　ｒｈｅｓｕｓ　ｅｍｂｒｙｏ　ｋｉｄｎｅｙ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ＭＡ一１０４　ａｎｄ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ＭＡ一１０４　ｓｕｅｈ　ａｓ　Ｍａｒｃ一１４５，ＣＬ２６２１，ＨＳ．２Ｈ　ａｎｄ　ＣＲＬ１１７１　ａｒｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｔｏ　ＰＲＲＳＶ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ａｎｄ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｔｏ　ｐｒｅｖｅｎｔ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｓｕａｌｌｙ，ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＰＲＲＳＶ　ｗｅｒｅ　ｒｅ—　Ｄｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｐｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｇｏｔ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｏｒ　ｗｅａｋｅｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａ—　ｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｈａｖｅ　ｐｏｏｒ　ｃｒｏｓｓ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｂｕｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｓａｆｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ｏｒｇａｎｉｓｍ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｑｕｉｃｋｌｙ　ａｎｄ　ｌａｓｔ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ａ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ　ｗｉｌｌ　ｐｅｒｓｉｓｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖａｃｃｉ—　ｎａｔｅｄ　ｓｗｉｎｅ　ｈｅｒｄ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｐｏｏｒ　ｓａｆｅｔｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ；ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ