GLP体系下高效液相色谱仪的3Q验证

刘静;张谦;王芳;肖云峰;常福厚

【摘 要】目的:以日立Chromaster高效液相色谱仪为例,探究良好实验室规范(GLP)体系下高效液相色谱仪3Q验证过程.方法:本实验通过对高效液相色谱仪的泵、柱温箱、检测器进行性能验证,从而证明该仪器符合使用要求,保证分析数据准确可靠.结果:液相色谱仪的泵、柱温箱、检测器以及整机性能验证符合使用要求,可进行分析实验,分析数据准确可靠.结论:通过GLP体系下的3Q验证,日立Chromaster高效液相色谱仪各方面性能优良,可以用于供试品及试剂管理部的含量测定. 【期刊名称】《北方药学》 【年(卷),期】2019(016)008 【总页数】3页(P1-3)

【关键词】良好实验室规范;高效液相色谱仪;3Q验证 【作 者】刘静;张谦;王芳;肖云峰;常福厚

【作者单位】内蒙古医科大学新药安全评价研究中心 呼和浩特010110;内蒙古医科大学新药安全评价研究中心 呼和浩特010110;内蒙古医科大学新药安全评价研究中心 呼和浩特010110;内蒙古医科大学新药安全评价研究中心 呼和浩特010110;内蒙古医科大学新药安全评价研究中心 呼和浩特010110 【正文语种】中 文 【中图分类】R197.39

药物非临床研究质量管理规范（good laboratorypractice，GLP）作为药物安全性评价方面的良好实验室规范，是国际上药物非临床安全性评价工作共同遵循的规范，也是国际毒理学数据交换和资料互认的基础[1]。GLP实验室目的是严格控制食品、化妆品、新药等非临床安全性评价试验的各个环节，在最大限度上消除可能影响实验结果的主观和客观因素，降低误差，确保实验结果的真实、可靠[2-3]。 通常在GLP实验室，可将仪器设备分为三类。A类仪器设备是指非测量辅助设备，如磁力搅拌器、蜗旋混合器等，不直接进行计量读数，状态通常只有正常和故障两种，且在出现故障时可立即被发现；B类仪器设备是指简单测量仪器或需经校验才能使用的辅助设备，如温度计、天平等。C类仪器设备是指分析测量仪器，如高效液相色谱仪（HPLC）、气相色谱仪（GC）等，必须进行完整和定期的校正、验证，此外在测试时可能还需要一定的质量控制措施[4]。为确保分析数据准确可靠，需对高效液相色谱仪进行3Q验证，之后方可进行供试品及试剂管理部分析工作。 所谓3Q验证，是指仪器设备的安装验证（installation qualification，IQ）、操作验证（operation qualification，OQ）和性能验证（performance

qualification，PQ）。其中涉及的性能验证是3Q验证中的关键步骤，通常每年进行一次，需要在实验前查阅资料，精心设计验证指标和验证方案[5]。在购买日立Chromaster高效液相色谱仪后，首先查看仪器预安装的地点及周边环境、配套设施是否符合安装要求，之后安装仪器运行所需的硬件及软件，即进行安装验证。安装验证完成后，调试仪器、设置仪器参数、校准仪器项目、开机运行仪器、查看各项功能是否正常、对操作人员进行操作培训，即完成仪器的操作验证。之后每年定期进行一次性能验证，合理设计实验方案，对高效液相色谱仪的泵、柱温箱、检测器及整机进行验证，真实记录实验数据，并出具性能验证报告，仪器部件出现较大的性能改变，就可能发生维修和更换，此时的性能验证参数的选择应该具有针对

性和选择性。供试品及试剂管理部的高效液相色谱仪在新药非临床安全性评价中承担供试品含量分析的工作，其检测数据是否准确在一定程度上影响药物毒理学结果[6]。

本文以本中心日立Chromaster高效液相色谱仪为例，探讨在GLP管理体系下高效液相色谱仪的PQ验证，全部实验是按照原国家食品药品监督管理局颁布的《药物非临床研究质量管理规范》（局令第34号，2017.7）实施，正确记载了试验实施方法，并正确反映原始数据。 1 材料与方法

1.1 实验标准品溶液及流动相

1.1.1 标准品：阿魏酸，规格：50mg/瓶，性状：白色粉末，批号：110773-201614，主含量：阿魏酸（99.0%）（详见表 1），保存条件：冷处（2℃～10℃），生产单位：中国食品药品检定研究院，保管场所：中心供试品及试剂管理部，剩余标准品的处理方法：根据供试品及试剂管理部SOP规定进行。 表1 阿魏酸化学信息阿魏酸分子式 阿魏酸分子量 阿魏酸结构式C10H10O4 194.19images/BZ_8_1940_2349_2204_2501.png

萘-甲醇，性状：液体，批号：17001，主含量：萘（1×10-7g/mL）（详见表2），保存条件：常温避光，生产单位：中国计量研究院，保管场所：中心供试品及试剂管理部，剩余标准品的处理方法：根据供试品及试剂管理部SOP规定进行处理。

表2 萘化学信息萘分子式 萘分子量 萘结构式C10H8 128.18images/BZ_8_1978_2887_2200_3016.png 1.1.2 流动相

甲醇（色谱级），批号：165502，保存条件：阴凉，生产单位：赛默飞世科技（中国）有限公司，保管场所：中心供试品及试剂管理部，剩余流动相的处理方法：

根据供试品及试剂管理部SOP规定进行。

乙腈（色谱级），批号：106246，保存条件：阴凉，生产单位：赛默飞世科技（中国）有限公司，保管场所：中心供试品及试剂管理部，剩余流动相的处理方法：根据供试品及试剂管理部SOP规定进行。

0.0855%磷酸水，保存条件：室温，现配现用，生产单位：内蒙古医科大学新药安全评价研究中心，保管场所：中心供试品及试剂管理部，剩余流动相的处理方法：根据供试品及试剂管理部SOP规定进行。 1.1.3 标准品及流动相的配制、标示、保管及使用

配制和标识：标准品及流动相由本中心配制成相应浓度，存放于试剂瓶中待用。贴上标签，注明实验编号、名称、浓度及有效期。

保管和使用：标准品及流动相在实验前由供试品保管负责人保管；由供试品及试剂管理部实验人进行操作。

1.2 实验主要仪器设备：Chromaster型高效液相色谱仪（日立高新技术公司）；BSA224S型电子天平（北京赛多利斯公司）；KH-500DV型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器公司）；C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）（安捷伦）。 1.3 试验方法[7-10]

1.3.1 泵性能验证：泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR。

表3 泵的性能验证试验方法流量设定值（mL/min） 0.5 1.0 2.0测量次数 3 3 3流动相收集时间（min） 10 10 10允许误差SS 5% 3% 2%SR 3% 2% 2% 启动仪器，按上表的要求设定流量，以蒸馏水为流动相，压力稳定后，在流动相出口处用已恒重的螺口瓶收集，称重，计算，即得。

1.3.2 柱温箱：测试方法：将温度计放置于柱温箱内（约为安装色谱柱的进口及出口位置），盖上箱盖，选择25℃、30℃、40℃进行鉴定，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，后每隔10min读数一次，共计5次，计算温度设定值误差

TS与控温稳定性TC。 1.3.3 DAD检测器

1.3.3.1 噪声与漂移：测试方法：将仪器各部连接好，紫外检测器调至250nm，流动相为甲醇，流速为1.0mL/min，待柱平衡稳定后，进行基线的测试，测试时间半小时，观察并记录测试结果。测试图谱见基线漂移测试。

1.3.3.2 最小检测浓度：测试方法：以甲醇为流动相，萘-甲醇（1.0×10-7g/mL）20μL 注入色谱仪，流速：1.0mL/min，254nm 处检测，记录色谱图，计算，即得。

1.3.4 整机性能：测试方法：以乙腈-0.0855%磷酸水（17∶83）为流动相；检测波长 316nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL，柱温：35℃。取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每毫升含12μg的溶液。连续进样5次，记录色谱图，计算，即得。 2 结 果[7-10]

2.1 泵性能验证：经分析计算，各流速下SS与SR均符合要求，仪器泵测试合格。 表4 泵的性能验证试验结果流量（mL/min）次数10min收集量（g）体积（mL）实际每分钟流出量（mL/min） SS SR 0.51.80%＜5%0.98%＜3%1.01.90%＜3%1.08%＜2%2.0 123123123 4.9897 4.9442 4.9718 9.9271 10.0169 9.9118 19.8462 19.7882 19.8397 5.11 5.06 5.09 10.17 10.26 10.15 20.33 20.17 20.33 0.511 0.506 0.509 1.017 1.026 1.015 2.033 2.027 2.033 1.55%＜2%0.30%＜2%

2.2 柱温箱性能验证：可执行标准：TS＜±2℃，TC＜±1℃。

表5 柱温箱性能验证试验结果温定设定值（℃）实际测得温度（℃）进口 出口25 12345TS 25.0 25.0 25.0 25.0 25.0 TC 00 25.2 25.2 25.2 25.4 25.4 0.28 0.20 30 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 12345 TS 00 40 TC 12345TS TC 30.0 30.0

29.8 29.8 29.8-0.12 0.2 39.0 39.0 39.0 39.0 39.0-1 0 38.5 38.5 38.5 38.5 38.5-1.5 0 2.3 DAD检测器

2.3.1 噪声与漂移：可执行标准：（250nm）噪声＜3×10-5Au，漂移＜5×10-4Au/hr。

图1 高效液相色谱仪噪声图谱 经色谱图分析（250nm），计算得： 噪声：7.6×10-6Au＜3×10-5Au 漂移：1.7×10-4Au/hr＜5×10-4Au/hr 图2 高效液相色谱仪漂移图谱

2.3.2 最小检测浓度：可执行标准：以萘-甲醇为样品，最小检测浓度为5.0×10-8g/mL，经色谱图分析，计算得：

2.4 整机性能验证：可执行标准：重复性（峰面积）RSD≤3%。

表6 整机性能验证试验结果重复性（峰面积）记录及计算次数 1 2 3 4 5峰面积 2649343 2631249 2603648 2560152 2550371 RSD 1.49%＜3% 3 讨论

综合以上试验研究，首先对高效液相色谱仪的泵进行性能验证，主要通过测量泵出流动相流量的稳定性，各流速下SS与SR均符合要求；其次对柱温箱进行验证，可执行标准为TS＜±2℃，TC＜±1℃，实验结果显示各温度下TS与TC均符合标准要求；再次对仪器检测器进行验证，主要对噪声与漂移以及最小检测浓度进行测量，结果符合要求；最后对整机性能进行验证，重复进样，对峰面积进行重复性考察，结果重复性（峰面积）RSD≤3%，综上，实验验证结果表明，本台高效液相色谱仪符合使用要求，可进行分析实验，分析数据准确可靠。性能验证报告由检测

人员和部门负责人签名确认后连同原始数据和之前完成的安装验证和操作验证报告以书面形式归档，即一个完整的3Q验证过程，3Q验证过程需要质量保障部门人员的监督[11]。随着GLP实验室承接的研究项目增多，产生的废弃物增加。供试品及试剂管理部在进行液相分析时会产生大量的液体废弃物：供试品原液，试验剩余供试品，液相色谱产生的流动相、洗液等废液。这些液体废弃物若处置不当，会威胁到实验室及周边环境，更有甚者会直接危害实验人员的人身安全，因此，在进行高效液相色谱仪的性能验证，保障仪器分析数据可靠的同时，也要加强对实验过程中产生的废弃物的安全管理，严格按照SOP的规定，及时处理、分类处理、集中收集、定点存放、标识清楚、专人负责[12]，交由有资质的公司统一处理。仪器设备管理工作持续且烦琐，严谨认真的仪器设备的管理工作会扫除实验工作障碍，带来规范可靠的实验数据。为保障实验数据的真实有效，不仅是GLP实验室需要进行仪器设备的3Q验证，所有类型实验室都应注重仪器的验证管理。 参考文献

【相关文献】

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[5]杨琛懋，马璟.关于GLP实验室仪器验证的探讨[J].毒理学杂志，2007，21（4）：285. [6]吴洪海，李五一，阮慧，等.综合性高校GLP实验室建设的探索[J].实验技术与管理，2013，30（2）：202-204.

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