发酵实习考试题(带答案).doc

1. 实消过程降温时，是先开冷却水，还是先开空气。为什么？如果更换次序，会造成什么 样的后果？

先开空气，后开冷却水。如果先开冷却水，后开空气，容易造成罐内温度骤降，导致罐 内压力降低，使外界带菌空气通过排气口进入罐体，造成发酵液染菌。同时，由于罐内压力 降低，致使罐外压力大于罐内压力，如果压力足够大（如炮弹罐直接用冷冻水降温，导致罐 内压力急剧下降），可能造成发酵罐罐体内陷，导致发酵罐损坏。 2. 分析造成如果种子生长不良的几种可能情况？

种子罐的染菌是带膜的短杆菌或链杆菌，属于芽鞄杆菌类，染菌的原因来源于消毒灭菌 的不彻底，而进一步的原因则是种子罐内的死角多，不易清理构成了灭菌的困难。另外培养 基配方不正确，pH、培养温度过高或过低，通气量过大或过小等都会引起种子生长不良。

3. 简要分析虫草在培养过程中染菌的几种可能原因？如果发生前期或中后期染菌，你将从 哪些方面入手查找原因？

夹层或蛇形管内冷水排放不彻底造成的染菌，这样的染菌多发生在生长的前、中期，主 要污染的菌型是耐热的长、短杆菌；带放操作引起的染菌，多发生在带放之后的发酵中、后 期，主要染菌的菌形是长、短杆菌；补料过程引起的染菌，该染菌多发生于发酵生长的中、 后期，染菌的菌型有杆菌、酵母高、霉菌等；频繁拆装高效空气滤芯引起的染菌，该染菌多 发生于发酵的全过程，污染的菌型有杆菌、酵母菌、霉菌；总空气压力频繁波动引起的染菌, 该染菌时间较乱，主要污染的菌型有杆菌、酵母菌、霉菌等；空气湿度大引起的染菌，该染 菌时间较乱，主要污染的菌型有杆菌、酵母菌、霉菌等；蒸汽压力波动引起的染菌，该染菌 时间较乱，该染菌菌型多为长、短杆菌；无菌管路逆向消毒灭菌引起的染菌，该染菌表现较 明确，该染菌菌型为长、短杆菌；无罐底阀罐实罐消毒的染菌，该染菌多发生于前、中期， 主要污染长、短杆菌；罐内死角、泄漏、结构不合理造成的染菌，多发生于某一罐连续染菌。 4. 灭菌的注意事项有哪些？

对于不同培养基原材料，使用不同的灭菌方法，例如培养基中蛋白质含量较高，微生物 被杀死的速度较慢，那么灭菌时就要特别注意控制消毒温度、时间和压力；消毒灭菌前要充 分考虑发酵设备的具体结构，比如发酵罐容积的大小，罐体内的不同结构，罐内的管路连接 等，这也是消毒灭菌的工艺控制点；灭菌时要充分考虑物料的体积；充分考虑各种细菌的致 死温度及致死时间，同时也应当在充分灭菌的前提下，尽可能大地减少培养基营养成分的最 少破坏；消

毒灭菌时注意蒸汽的质量，避免因蒸汽质量问题引起灭菌不彻底现象。 5. 根据染菌的不同菌型，举例分析大概的染菌原因

（1）

染酵母菌。可能由于以下几方面原因：种子制备过程中的倒瓶、合瓶等操作中

带 酵母菌；补料管路等设备的渗漏，造成酵母菌的侵入；培养基灭菌不彻底；发酵罐搅拌密封 处的泄漏，使发酵液外溢，大量繁殖酵母菌；各种物料及发酵液倒流空气管路，造成空气系 统的污染构成死角，同时在管路中培养、繁殖大量的酵母菌。

（2）

、染霉菌。可能原因如下：没有定期对生产环境进行消毒灭菌，空气湿度大，

造成 环境中霉菌增多，增加了染菌几率；各种物料、冷水倒流空气总管路，在空气系统中构成死 角，培养并繁殖大量的霉菌；发酵罐搅拌密封处的泄漏，霉菌进入发酵罐。

（3）

、染长、短杆菌。可能原因如下：未被彻底净化的空气，尤其是无菌空气中带

油、 带水严重，同时空气过滤器又失去除滤效果；冷却水系统设备的泄漏，如发酵罐的夹层、蛇 形管的设备穿孔；培养基物料的消毒灭菌不彻底；发酵设备上的死角和泄漏；发酵罐搅拌密 封处的泄漏，发酵液外溢，以及发酵过程中用水冲洗罐顶。

（4）

染芽抱杆菌。可能原因如下：发酵设备中的泄漏、死角造成的灭菌不彻底；培

养 基物料消毒灭菌不彻底。

（5）

、染球菌。可能原因如下：种子制备过程中的器材，人员消毒灭菌不彻底，移

种操 作上的带菌；其次来自设备的泄漏以及补料液的消毒灭菌不彻底。

6. 值班岗位生产异常情况（主要叙述未得到通知时的停电，停空气情况）处理的相关SOP。

（1）

、突然停电：迅速调整空气加热系统（自控改手控），控制温度在45°C-

55°C之间， 然后向生产管理人员或值班室汇报、查询；复电后，调整空气加热系统（手控改自控），设 定温度为50°C；及时向生产管理人员汇报情况。

（2）

、突然停无菌空气：先关闭所有灌上大排气阀，然后关闭空气空气近罐阀（罐

的顺 序是从大到小）；迅速向三班调度或班组长汇报，中夜班迅速向总值班室汇报查询，听取他 们的通知；恢复无菌空气后，先开各罐的空气近罐阀，后开大排气阀，调节各参数至工艺要 求。

7. 列举发酵工段涉及的各种阀门的基本分类及各自的优缺点。

（1）、截至阀。优点：密封面之间的摩擦力小，比较耐用；严密性能好，易于开关，维 修方便；开启高度可以使用丝扣拉杆控制，易于调节流量；耐受高温及压力，不易损坏。缺 点：截至阀阀芯阻力大，影响流量和流速；截至阀不易于在黏稠的物料中使用，这样会造成 阀门的密封面不严密而泄漏；截至阀安装时有方向性，逆向安装会造成阻力更大。

(2) 、止回阀。优点：介质在阀体内单向流动，阻止介质倒流；耐受高温、高压，不易 变形。缺点：不能使用在粘稠和有颗粒的物料介质上；不能使用在有腐蚀性介质的管路上。

(3) 球形阀。优点：流体阻力小，流量大，极少有压差的表现；不受安装方向性的制 约；能耐受高温、高压，耐腐蚀，严密性较好，阀体本身不存在死角；阀门本身结构简单， 极少有泄漏点。缺点：不能作微量调节作用，最好时全开或全闭；进罐能耐受高温，也不要 在长期高温管路上使用。

(4) 、针型阀。优点：耐受高温、高压，不易腐蚀；易于控制微量流速和流加、滴加补 料；操作方便，易于更换，易于维修。缺点：易于损坏，尤其是阀头容易掉头；因为结构小， 通道小，所以容易被堵塞。

(5) 、隔膜阀。优点：流体阻力小，流速不受影响；可以使用在黏稠或有颗粒的介质上; 介质不会与阀头部分接触，因此不存在阀头填料密封处泄漏的弊端；结构简单，耐受腐蚀。 缺点：除特制的耐受高温、高压的隔膜阀之外，一般的手动隔膜阀不耐受高温、高压；容易 损坏，渗漏，变形；必须定期检查并定期更换隔膜阀垫。

& 简要说明一下现阶段虫草发酵生产涉及的必要设备？你认为发酵可以增加或者减少什 么设备，为什么？

一级、二级、三级、四级发酵罐，液化罐，配料池，电子称，空气过滤系统，废气处理 系统、仪表监视系统等。

9. 对发酵能源(水，蒸汽，空气)进行有效的控制，可以从哪些环节(方面)着手？

饮用水：高温水回用，冷却发酵液的高温水用于液化料的液化；饮用水龙头做到人走即 关，避免长时间开着水龙头，节约用水。

冷冻水：发酵罐灭菌完后，先用饮用水降温，温度降至40-509后，再用冷冻水降温。 蒸汽：灭菌时大排气微开，避免蒸汽的人为浪费；在确保不染菌的情况下，取消空消。 空气：虫草培养过程中空气通气量要合适，避免开得太大或太小，以免造成菌体生长不 良或浪费能源。清洗发酵罐后对罐内吹风时，空气开量也合适，避免造成空气的浪费。 10. 你个人认为发酵班组在管理方面存在哪些不足，应该怎么改进？