・１８２・ 科技论坛 注射用人免疫球蛋白的制备 李宁孙孝军张磊 （哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司，黑龙江哈尔滨１５００２８） 摘要：目的：建立注射用人免疫球蛋白的制备方法，制备样品符合相关规定，产品质量与参比制剂一致。方法：通过溶解、加乙醇反 应、调节ｐＨ值并采用压滤技术，分离得到组分上清液，上清液经过乙醇反应、调节ｐＨ值及冷冻，经过再次压滤，得到组分沉淀物，沉淀物 经过注射用水溶解后，得中间体，中间体经检测合格后经低ｐＨ值、膜过滤、除菌及冷冻干燥，得成品。结论：所制备样品工艺可行，质量稳 定。 关键词：压滤；免疫球蛋白；膜过滤 人体对外来抗原进行免疫应答的主要物质为抗体，血浆来源的 水洗至中性，用注射用水洗３至５次，最后用过０．４５ ｍ膜的注射用 人免疫球蛋白制品按注射途径分为静注和肌注人免疫球蛋白，由于 水冲洗３次，包装好于１２１℃，３０ｒａｉｎ灭菌。 １．７铝盖处理 来源及制备工艺限制，导致本品的价格昂贵且供不应求。传统的制 备方法多采用低温乙醇法，生产工艺一致但收率及产品质量相差显 操作过程：将铝盖放人塑料筐中，用纯水洗净，浸于７５％乙醇中， 著。我们通过工艺改进，采用压滤技术，使得产品质量有明显提升，稳 充分漂洗后，自然沥干备用。 定性极好，同时收率提高Ｉ 。所采用工艺已应用于工业化生产。 １．８冻干 １ｆ制备过程 根据中间体含量进行灌装，灌装过程中检查可见异物是否符合 １．１分离 规定，分装样品先经过半压塞，速速转移至冻干机内，半压胶塞留有 沉淀的溶解：血浆经处理得组分Ⅱ和Ⅲ，称量组分Ⅱ和Ⅲ沉淀， 空隙，以便抽干水分。冻干机先降温至一ＩＯ￣Ｃ，该步骤为保证药品质 向反应罐内加入８倍量低温（５ｏｃ）注射用水，搅拌使沉淀物溶解。ｐＨ 量关键因素之一。 值：向其中加入醋酸盐（ｐＨ４．ｏ）缓冲液，调节ｐＨ至５．１－Ｉ－０．１，反应 入柜：待所有制品人柜后，检查每层制品温度探头的放置情况，关 １５ｍｉｎ，继续搅拌３０分钟。乙醇反应：向上述反应溶液中加入一２０℃ 紧箱门。冻结：制冷冻干机搁板，使导热油迅速降温，最终使制品温度 以下的无水乙醇，使反应液中乙醇浓度达到２０％４－２％，最终温度控 达－４５℃以下。第一次升华：制冷冷凝器，待其温度达到 ０℃以下 制在＿４～５℃，搅拌１小时。压滤：压滤前后保持温度在３ －４２℃，称量 后，抽真空，真空达８Ｐａ以下后，迅速升华，再稳定２￣３小时后，开加热 组分沉淀于一３０￣Ｃ保存，称组分上清液的重量。 器缓慢加热搁板，逐渐提高制品的温度，使其在８—１０小时内加热至 １．２沉淀 ５￣Ｃ Ｏ￣Ｃ，保证制品在共熔点≤一ＩＯ￣Ｃ），进行第一次升华，散失绝大部 调节ｐＨ值：向组分Ⅲ的上清液中加人０．１Ｍ碳酸氢钠缓冲溶 分水份，使其肉眼看不见为止。在继续维持２￣３小时。第二次升华：开 液，调节溶液ｐＨ值，使溶液的ｐＨ值保持在８ －０．４５范围内，保持３０ 加热器缓慢加热搁板温度３０￣（２，使其２０～２５小时内加热隔板温度至 分钟。盐浓度调节：向其中加人氯化钠的浓溶液，控制反应罐温度，使 ３０℃，加热期间观察真空度变化，使真空度维持在１０Ｐａ以下。当各层 制品温度在－－４—５ｏＣ、称量制品重量。２０％乙醇反应：向反应液加入 搁板制品温度均达３Ｏ℃以上时，保温５至６小时升华结束。盖紧胶 低温冷冻下的９５％乙醇，使反应液的乙醇浓度达２０％，在加入乙醇过 塞，出柜、放真空待气压平衡后，打开干燥箱箱门。合格后送至轧盖。 程中，冷却反应液，最终温度达一５℃，搅拌３０ｍｉｎ，静止２小时，压滤。 １．９轧盖 组分Ⅱ压滤：压滤前控制在制品温度至一６￣Ｃ，压滤结束称量组分Ⅱ 先检查轧盖机的良好状态，开启轧盖机测试压力，按要求每次一 沉淀，于一３０￣Ｃ下保存。 支轧盖后放回不锈钢托盘内，记录轧盖压力，用密封性测试仪测定密 １．３吸附提纯 封性。制备三批样品，按照其质量标准【３—４】进行检验，结果均符合规 沉淀溶解：用５倍量的低温注射用水ｆ０～５ ｏｃ）溶解组分Ⅱ沉淀，加 定，同时与参比制剂进行进行质量比较，结果供试品质量与参比制剂 入注射用水时不断搅拌。溶液的ｐＨ值调节：向其中加入１％盐酸溶 致。对所制备样品进行稳定性检验（影响因素及加速与长期１，同时 液，调节组分Ⅱ溶液的ｐＨ值，使ｐＨ值在７．０４－０．５之间，持续搅拌反 与参比制剂进行比较稳定性变化情况，结果供试品与参比制剂各项 应３０分钟。静止２０分钟，向其中加５％的氯化钠溶液调溶液的电导 指标变化趋势一致。 率，使其在１．０一Ｉ．２之间。凝胶吸附：将溶胀好的凝胶用０．０１Ｍ磷酸盐 ２结论 缓冲液平衡至流出液的ｐＨ值在６．０—６．５后，上样蛋白液，收集蛋白 低温乙醇Ｃｏｈｎ６法采用低温冷冻、离心分离血浆蛋白成分。其 峰，上样结束后，用Ｏ．ＯＩＭ磷酸盐缓冲液冲洗凝胶上的残余蛋白，合 自身的缺点越来越明显地暴露出来，操作过程中不易控制温度、离 并上述两项蛋白液，记录重量。酸化处理：缓慢加入Ｉ％ＨＣＬ调节蛋 心机分离效果不稳定、生产安全性不高、分离速度慢、操作温度低。 白液ｐＨ至３．２～３．５，继续搅拌３０分钟。 我们采用低温乙醇压缩过滤分离法，相关研究结果表明产品工艺稳 １．４超滤 定、质量可控、生产效率高。产品质量提高到一个新的水平，值得全 超滤预浓缩：将调整好的蛋白液转移至已经过蒸汽消毒灭菌的 面推广及应用。 反应罐中，开启超滤器，开始进行预浓缩，当蛋白浓度达６％左右，结束 参考文献 预浓缩并称重。透析脱盐脱醇：向其中加入预冷ｆ２～５ｏｃ）的注射用水。 ［１】张峰．静注人免疫球蛋白工艺优化及工程化设计『Ｊ１．山东大学 稀释蛋白浓度至２—３％，透析７倍水，透析过程中补加１％的盐酸适 ２０１３年１０月１５日（学位年度）． 量。浓缩：透析结束后停止加水，浓缩至蛋白浓度达１０％以上，转移至 【２】唐思远，林东强，童红飞，姚善泾．人免疫球蛋白Ｇ酶解制备Ｆａｂ和 Ｆｃ片段及其分离￣４／２［Ｊ１．化工学报，２０１３（５）６４，５：１７５０—１７５７． 洁净不锈钢容器内称量，取样测蛋白浓度及ｐＨ值。 １．５配制 【３］Ｌｉ ＱＺ，Ｌｉ Ｐ，Ｇａｒｅｉａ ＧＥ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｉｃ ｐｒｏｉｆｌｉｎｇ ｏｆ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉ ｔｒａｎ－ 操作过程：用Ｉ％ＨＣＬ调整浓缩后蛋白液的ｐＨ为３．５～４．０，加入 ｓｃｒｉｐｔｓ ｉｎ Ａｓｉａｎ Ｑｉｇｏｎｇ ｐｒａｅｔｉｔｉｏｎｅｒｓ：ａ ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａ－ 处方量麦芽糖后，补加注射用水，使制品最终含免疫球蛋白 ｔｉｏｎ ｂｙ ｍｉｎｄ—ｂｏｄｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ｊ Ａｈｅｍ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｍｅｄ ２００５，１ １ ６０—６５ｇ／Ｌ，含麦芽糖１０％，取样复测ｐＨ并称重。 （１）：２９－３９． １．６分装 ［４】任跃明，程雅琴，倪道明．静脉注射人免疫球蛋白的质量控制冲国 按无菌操作要求迅速连接好分装管道，按灌装机操作规程进行 生物制品学杂志。２０１５。１８（１）：７３—７５． 灌装、装量不低于标示量。分装用具处理：耐碱用具用０．２Ｎ ＮａＯＨ浸 泡过夜，不耐碱器具用１５％双氧水浸泡４小时以上，最后用大量纯化 一一作者简介：李宁（１９８３，１－），女，汉族，哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司。