东北地区野生赤芍质量的分析评价

于海娇;尹春梅;王子刚;张瑶;刘秋月;杨航;王雪;秦梦

【摘 要】目的 本文研究了东北地区野生赤芍中4种有效成分含量的差别.方法 采用高效液相色谱法,《中华人民共和国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法和附录XA水溶性浸出物测定法,以及紫外分光光度法,比较了芍药苷、水溶性浸出物、挥发油以及多糖含量的差别,并对药材质量的差异性进行分析.结果 不同产地赤芍中的4种有效成分均有显著性差异,但是,它们都符合《中国药典》标准.结论 东北地区的赤芍药材都符合《中国药典》标准,它们可以增加赤芍药材的供应量,做到既经济又有效.

【期刊名称】《人参研究》 【年(卷),期】2014(026)002 【总页数】4页(P34-37)

【关键词】野生赤芍;芍药苷;多糖;挥发油;水溶性浸出物 【作 者】于海娇;尹春梅;王子刚;张瑶;刘秋月;杨航;王雪;秦梦

【作者单位】吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院 吉林长春·130118 【正文语种】中 文

赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根[1]。主产于内蒙古、吉林、辽宁、黑龙江等地，多为野生品种。赤芍是现代中医中常用的一类中药材，具有活血化瘀，清热凉血的作用，用于经闭痛经、血热吐衄、跌打损伤[2]等。目前，对于赤芍中有效成分的研究日渐活跃。本文以芍药苷、挥发油、水溶性浸出物以及可溶性多糖的含量为指标[3],比较东北地区野生赤芍中各指标的差异,以便对东北地区野生赤芍药材质量进行评价和分析研究。 1.1 材料

试验所选取药材取自东北地区10个不同产地野生赤芍，分别为：吉林四平、吉林敦化、吉林辽源、吉林通化、辽宁鞍山、辽宁绥中、内蒙赤峰、内蒙海拉尔、黑龙江林口、黑龙江黑河，其中吉林四平的药材取自于赤芍种植基地。标准品：芍药苷标准品（上海圻明生物科技有限公司）。

药品：甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾，无水乙醇为分析纯，无水葡萄糖。 1.2 仪器

高效液相色谱仪 LC-20AD （日本岛津公司）（ODS-SP C18（5um 4.6×150mm）色谱柱；电热鼓风干燥箱BPG-9140A（上海一恒科技有限公司）；循环水式真空泵SHB-3T（郑州长城科工贸有限公司）；水浴锅HH-4（金坛市荣华仪器制造有限公司）；紫外-可见分光光度计UV-2450（日本岛津公司）；超声波清洗器KQ-250E（昆山市超声仪器有限公司）；挥发油提取器 。 1.3 方法

1.3.1 芍药苷含量的测定

根据采用高效液相色谱法测定不同产地赤芍中芍药苷的含量[4]。 1.3.1.1 色谱条件与系统适用性试验：

ODS-SPC18（5um,4.6×150mm）色谱柱；流动相：甲醇-0.05mol/l磷酸二氢钾（40:60）；柱温：40℃；波长：230nm；流速：1ml/min；时间：15min；

进样量：20μl。 对照品溶液的制备：

称取经五氧化二磷减压干燥器干燥36小时至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含1mg的标准品溶液。 1.3.1.2 供试品溶液的制备：

分别精密称取10个不同产地药材粉末 （40目）0.5000g，置于100ml具塞锥形瓶中，分别加入25ml甲醇，称定重量，浸泡 4h，超声处理 20分，静置20分，冷却后再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。用0.45μg的微孔滤膜过滤[5]，即得到样品溶液10种。 1.3.1.3 标准曲线绘制

分别取对照品溶液0.04、0.06、0.08、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml用甲醇定容至1ml，分别得到 0.04、0.06、0.08、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mg/ml的梯度标准品溶液[6]。分别吸取以上8种浓度的标准品溶液进样20μl，按照上述的色谱条件进行检测，得标准曲线y=30130x -210862，r=0.9998，线性范围0.64~21.6μg，结果见图1。 1.3.1.4 精密度试验

取1号赤芍按1.1.3方法制成供试品溶液，重复进样5次,每次进样20μl，测得芍药苷峰面积的积分值，RSD为0.67%。精密度良好。 1.3.1.5 重现性试验

取5号赤芍药材，按上述供试品溶液的制备方法，制成供试品溶液5份,各吸取 20μl进样进行测定,测得芍药苷含量RSD为1.74%，表明此方法重现性良好。 1.3.1.6 稳定性试验

取8号药材按上述方法制成同一份供试品溶液，同一色谱条件下,分别在 0,2,4,8,10，12 h各进样20μl测定芍药苷峰面积积分值RSD为2.08%，此法在

12 h内稳定。

1.3.1.7 加样回收率试验

精密称取5份已知芍药苷含量（1.459%）的样品粉末各0.25 g，每个样品中加入对照品适量，按上述方法制备供试品溶液，并于同一色谱条件下进行色谱分析，结果见表1。

1.3.2 多糖含量的测定 1.3.2.1 待测液制备

准确称取经预处理的赤芍粉末约10g，置于烧杯中，加入100ml蒸馏水，超声提取1h，离心，取上清液，重复以上步骤，将两次提取离心的上清液混合。将浓缩液装入分液漏斗中，加入30ml石油醚，震摇，静置1min，取下层溶液并与氯仿-正丁醇（4∶1）溶液混合，离心，取上清液，加入1/4体积的氯仿-正丁醇溶液，重复5次至无蛋白。取上述溶液加入3倍体积85%乙醇溶液，恒温4℃过夜。离心取沉淀，依次用无水乙醇，丙酮，无水乙醚洗涤沉淀，干燥，最后得到粗多糖[7]。

1.3.2.2 标准液的制备

精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，至100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，浓度相当于1.0 mg/ml。 1.3.2.3 标准曲线的制备

精密量取标准液0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml于7个50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。分别吸取1ml于具塞试管中，加0.5%苯酚1ml，摇匀，快速滴入浓硫酸5.0ml，在室温中放置30min[8]。按分光度法，于490nm波长处测定吸光度值，绘制标准曲线，得到回归方程：y=9.9857x+0.1624 r=0.9994 1.3.2.4 样品液的制备

称取干燥后所得赤芍粗多糖0.01g定容于100ml量瓶中，精密称取10ml于

25ml容量瓶中溶解，定容到刻度,得到浓度为40ug/ml的样品液。 1.3.2.5 样品溶液的含量测定

精密吸取1.0ml待测液于具塞试管中，加入0.5%苯酚1ml，摇匀后，快速滴入浓硫酸5.0ml，在室温中放置30min。于490nm波长下测定吸光度（A），根据回归方程计算多糖含量。 1.3.3 挥发油含量的测定

取各样品约40g，精密称定，置500ml圆底烧瓶中，加水500ml蒸馏水与玻璃珠数粒，振摇混合后，放置过夜。连接挥发油测定器与回流冷凝管。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热。放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0刻度线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度。用无水硫酸钠干燥后得淡黄色油状物并计算收油率（W1/W）[9]。 1.3.4 水溶性浸出物含量的测定

取各样品约2g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加水50ml。参照 《中华人民共和国药典》2010版一部附录XA水溶性浸出物测定法中的热浸法进行测定[10]。

2.1 芍药苷的测定结果

不同产地赤芍的芍药苷测定，结果见表2。

从表2可以看出，10个产地的野生赤芍中：吉林四平、吉林敦化、吉林辽源、吉林通化、辽宁绥中、内蒙赤峰、内蒙海拉尔和黑龙江林口的芍药苷含量差异性显著（p＜0.01），其中含量最高的产区为吉林辽源。辽宁鞍山和黑龙江黑河芍药苷含量无显著性差异 （p＞0.01）。 2.2 多糖含量测定结果

不同产地赤芍的多糖含量测定，结果见表3。

从表3可以看出，吉林四平、吉林敦化、吉林辽源、辽宁鞍山、内蒙赤峰、内蒙海拉尔、黑龙江林口的多糖含量差异性显著（p＜0.01），其中吉林敦化产地赤芍多糖含量最高。吉林通化、辽宁绥中、黑龙江黑河的多糖含量无显著性差异（p＞0.01）。

2.3 挥发油含量测定结果

不同产地赤芍的挥发油含量测定，结果见表4。

从表4可以看出，吉林敦化、吉林通化、内蒙赤峰、内蒙海拉尔差异性显著（p＜0.01），其中吉林敦化的挥发油含量最高。吉林四平、吉林辽源、辽宁绥中、辽宁鞍山、黑龙江林口、黑龙江黑河无显著性差异（p＞0.01）。 2.4 水溶性浸出物含量测定结果

不同产地赤芍的水溶性浸出物含量测定,结果见表5。

从表5可以看出，吉林四平、吉林敦化、吉林辽源、吉林通化、辽宁鞍山、内蒙赤峰、内蒙海拉尔、黑龙江林口差异性显著（p＜0.01），其中水溶性浸出物含量最高的产地为内蒙海拉尔。辽宁绥中、黑龙江黑河无显著性差异（p＞0.01）。 本文主要针对东北地区野生赤芍中4种有效成分进行质量评价分析，这10个产地的药材都符合药典要求，可以做赤芍药材使用。但赤芍中芍药苷含量最高的产地为吉林辽源，多糖含量最高的产地为吉林敦化，挥发油含量最高的产地为吉林敦化，水溶性浸出物含量最高的产地为内蒙海拉尔。综合以上含量测定结果，吉林产区的赤芍药材普遍更好。这对于合理利用东北地区赤芍资源,增加赤芍供应量,既经济又有效。

*本文通讯作者。

【相关文献】

[1]国家药典委员会.中国药典 [S].一部.附录. 2010.

[2]陈勇,杨敏,王飞.赤、白芍功效主治异同的本草学研究[J].四川中医,2006,24(11):42～43. [3]周红涛,骆亦奇,胡世林,等.赤芍与白芍的化学成分含量比较研究 [J].中国药学杂志,2003,38 (9):654～657.

[4]黄群莲,王利国,唐灿,等.赤芍提取工艺条件优选[J].中成药,2010,32(2):303～304. [5]由会玲,严玉平,高艳芝,等.芍药及不同炮制品中芍药苷含量的比较研究 [J].四川中医,2009, 27(6):54～56.

[6]周学刚,陈淑欣,魏东华,等.不同种质和不同部位白芍原植物中芍药苷和芍药内酯苷的含量测定[J].医药导报,2011,30(11):1477～1480.

[7]刘思静,金传山,吴德玲,等.白芍不同炮制品化学成分含量比较 [J].亚泰传统医药,2013,9(5): 41～43.

[8]雷晓莉，宋芳芳，彭成，等.不同产地川明参药材中多糖含量测定 [J].中药与临床,2011;2(1):49～50,54.

[9]刘玉峰,刘洋,潘明辉,等.赤芍挥发油成分的GC-MS分析 [J].中国药房,2011,22(27):2543～2545. [10]杨媛媛.维吾尔药新疆赤芍的定性分析[J].亚泰传统医药,2011,7(9):16～18.